Solarbio Tissue and Blood Alkaline Phosphatase (AKP/ALP) Kit de ensayo de actividad

Tissue and Blood Alkaline Phosphatase (AKP/ALP) Kit de ensayo de actividad

Nota: Tome dos o tres muestras diferentes para predecir antes de la prueba..

Equipo de operación: espectrofotómetro

Numero de catalogo: BC2140

Tamaño: 50T/24S

Componentes:

reactivo de extracción: Líquido 30 mL×1 bottle, Almacenamiento a 4 ℃.

Reactivo 1: Líquido 10 mL×1 bottle, storage at 4℃ and protect from light.

Reactivo 2: Líquido 10 mL×1 bottle, storage at 4℃ and protect from light.

Reactivo 3: Líquido 30 mL×1 bottle, storage at 4℃ and protect from light. It cannot be used if it turns to blue-green.

Estándar: Líquido 1 mL×1 bottle, 10 μmol/mL phenol standard solution, Almacenamiento a 4 ℃. Dilute with distilled water to 2.5 μmol/mL before use.

Descripción del Producto:

AKP/ALP is a zinc-containing glycoprotease, which hydrolysis various natural and synthetic phospholipid monoester compounds in alkaline condition. AKP / ALP are widely distributed in human organs, mainly in liver.

In alkaline condition, AKP/ALP catalyzes hydrolysis of disodium phenyl phosphate to phenol, and the phenol reacts with 4-Aminoantipyrine and potassium ferricyanide to form red quinone derivative, which can be detected absorbance at 510 Nuevo Méjico. AKP/ALP activity can be calculated by measuring the absorbance increase rate at 510 Nuevo Méjico.

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

espectrofotómetro, centrífuga de escritorio, transferidor, 1 cubeta de vidrio de ml, hielo y agua destilada.

Procedimiento:

I. Enzima preparación:

Agregar 1 mL Extraction reagent to 0.1 g tissue, grind thoroughly. Centrifuge at 4℃, 10000 rpm para 10 minutos. Take the supernatant on the ice for test. Blood sample can be detected directly. Dilute with Extraction reagent if concentrate is high.

II. Determinación procedimiento:

1. Precalentar el espectrofotómetro para 30 minutos, ajustar la longitud de onda a 510 Nuevo Méjico, poner el contador a cero con destilado
2. Add reagents in 1.5 mL cuvette as the following:

Nombre del reactivo (µL)	Test tube A3	Control tube A4	Blank tube A2	Standard tube A1
Agua destilada			20
Solucion estandar				20
Flotante	20
Reactivo 1	200	200	200	200
Reactivo 2	200	200	200	200
Mezclar bien, stay in 37℃ for 15 minutos.
Reactivo 3	600	600	600	600
Flotante		20
Mezclar bien, detect absorbance at 510 Nuevo Méjico, record as A1, A2, A3, A4.

III. AKP/ALP activity calculation:

• Concentración de proteínas:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol phenol in the reaction system per minute at 37℃ every mg protein.

AKP/ALP (Prot. U/mg) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(RCP×Vs)÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷Cpr

• Peso de la muestra:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol phenol in the reaction system per minute at 37℃ every g sample.

AKP/ALP (Peso U/g) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(W÷Ve×Vs)÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷W

• Sangre:

Definición de unidad: Una unidad de actividad enzimática se define como la cantidad de enzimas que cataliza la generación de 1 μmol phenol in the reaction system per minute at 37℃ every mL serum.

AKP/ALP (unidades/mL) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷Vs÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)

C: Standard concentration, 2.5 µmol/mL;

Soga: Volumen total de reacción, 1020 μL=1.02 mL; contra: Volumen sobrenadante, 0.02 mililitros;

ve: Volumen de extracción, 1 mililitros; W.: Peso de la muestra, gramo;

t: Tiempo de reacción, 15 minutos;

RCP: Concentración de proteína de muestra, mg/mL.

Nota:

1. Reactivo 1, Reactivo 2 and Reagent 3 should be protected from
2. Reactivo 3 cannot be used if it has changed toblue-green.
3. Mix thoroughly quickly after adding Reagent 3 to avoid incomplete

Ejemplo experimental:

1. Take 0.1g of mouse pancreas and add 1 mL of Extract solution for homogenate. After taking the supernatant, operate according to the determination steps. Calculate AT = 0.324, AC = 0.037, AB = 0.022, AS = 0.677. Calculate the enzyme activity according to the sample mass: AKP/ALP enzyme activity (masa U/g) = 0.167×(AT-AC)÷(AS-AB) ÷ W =0.167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0.1=0.732 U/g
2. After taking the rabbit serum, La operación se lleva a cabo de acuerdo con los pasos de determinación, and the enzyme activity is calculated as follows: AT = 0.190, AC = 0.015, AB = 0.022, AS = 0.677. According to the blood volume, La actividad enzimática se calcula de la siguiente manera: AKP/ALP enzyme activity (unidades/mL) = 0.167×(AT-AC) ÷ (AS-AB) =0.167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)=0.0446U/mL.

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