| 属性 | 詳細 |
|---|---|
| 猫番号 | SN0020 |
| サイズ | 50T/100T |
| ストレージ | 保存場所 4 短期保存の場合は °C. 長期保管用, キットは次の場所に保管できます。 -20 ℃または -80 ℃. |
キットのコンポーネント
| コンポーネント | 50T | 100T |
| 溶解バッファー | 100ミリリットル | 200ミリリットル |
| 試薬A | 2.5ミリリットル | 5ミリリットル |
| 中バッファー | 25ミリリットル | 50ミリリットル |
| ストアバッファ | 5ミリリットル | 10ミリリットル |
製品説明
- 動物細胞および組織から純粋な核を単離します (柔らかい: 肝臓・脳, 難しい: 筋, 培養された)
- アプリケーション: 細胞死 (アポトーシス), 合図, 代謝 & タンパク質の研究
- タンパク質を含まない核 & ヌクレアーゼ汚染
プロトコル
サンプルの準備:
- ティッシュ:
- 100～200mgの新鮮な組織を摂取する (肝臓, 脳, 心臓)
- PBS/生理食塩水で洗浄します, ドライ, 小さく切り分ける
- 1mlの予冷したLy10isバッファーでホモジナイズします & 50µL 試薬 A (アイスバス, 20バツ)
- 培養細胞:
- 細胞を消化して洗浄する
- 遠心 (5-10分, 800g), 上清を捨てる, 集める & セルを数える
- 再懸濁 5×10^7 個の細胞を 1ml の予冷した溶解バッファーに溶解
- 50μLの試薬Aを追加, 均質化する (アイスバス, 20-30バツ)
核隔離:
- ホモジネートを1.5ml遠心管に移す.
- 遠心 (5分, 700g, 4℃), 上清を捨てる (核ペレットが残っている).
- 核ペレットを0.5mlの予冷した溶解バッファーで再懸濁します。.
- 0.5ml 培地緩衝液を含む新しいチューブに移します。 (慎重に重ねた).
- 遠心 (5分, 700g, 4℃), 上清を捨てる (核ペレットが残っている).
- 核ペレットを5ml培地緩衝液で再懸濁します。.
- 遠心 (10分, 1000g, 4℃), 上清を捨てる (精製核ペレット).
ストレージ:
- 精製した核を50～100μlの保存バッファーまたは目的のバッファーに再懸濁します。.
- 核はすぐに使用できる、または -70°C で保存可能
ノート:
完全な核の確保:
- 低温: すべての手順を低温で実行します.
- スピード: プロセス全体を通して迅速に作業する.
- 細胞破壊: 重要なのは、細胞小器官を損傷せずに細胞を破壊することです.
- ティッシュ: 効率的に均質化するには、ぴったりとフィットする乳棒を備えた小容量のガラス製ホモジナイザーを使用してください。.
- 培養細胞: 接着細胞を破壊するのはさらに困難です. 最適な結果を得るには、小型ホモジナイザーとしっかりとした乳棒を使用してください。.
遠心分離:
- 正しい遠心速度を計算する (回転数) 希望の相対遠心力に基づいて (RCFまたはGフォース) 公式を使って:
- G = 1.11 x 10^-5 x R x (回転数)^2
- G: RCF (g)
- 回転数: 1分あたりの回転数 (二乗)
- R: ローター半径 (cm)
ダウンストリームアプリケーション:
-
- ウェスタンブロットおよび2D-PAGE用, ローディングバッファーを加えて核サンプルを直接溶解します.
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