少量組織マイクロRNA抽出キット

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0333	SN0334
RNA抽出カラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
DNAクリーンアップカラム (セット)	50 (セット)	100 (セット)
RNA抽出 バッファII	30ミリリットル	2×30 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30ミリリットル	2×30 ミリリットル
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2×15 ミリリットル
溶出バッファー	20 ミリリットル	20 ミリリットル
取扱説明書	1	1

 

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) 乾燥状態で、安定しています 12 月.

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

このMicroRNA精製キットは、さまざまな組織からマイクロRNAを精製するための高速で効率的な方法を提供します, ほとんどの種に適しています. 組織を超える 100 MGは、このRNA精製キットを使用して処理できます. キットは、実験プロセス中にゲノムDNAと大きなRNAフラグメントを除去するために特別なDNAクリーンアップカラムテクノロジーを採用しています. 一般的に, DNAカラムの追加消化は必要ありません, マイクロRNAの劣化の防止.

RNAラピッド精製キットは、植物のマイクロルナを抽出できます 1 時間. 抽出されたmicroRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, 等. 精製プロセス全体では、フェノールクロロホルムなどの有毒試薬は必要ありません, MicroRNA精製キットを作成する他のさまざまなサンプルに適しています.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ご使用の前に, 指定された量の無水エタノールを追加します ウォッシュ バッファ 1 試薬ボトルのラベルによると, 無水エタノールの追加を示すためにラベルのチェックをマークします.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. EDTAがその後の実験に影響を与える場合, 溶出緩衝液の代わりに滅菌脱イオン水を使用することをお勧めします.

1. サンプル処理:

あ. 植物または動物組織: 可能な限り新鮮な組織を収集します. 植物と動物の組織用, 液体窒素で粉砕します, その後、すぐに追加します 500μLのRNA抽出バッファーII. 徹底的に反転して混ぜます, RNA分解を防ぐために、溶解物の組織の凝集を避ける.

B. 細胞組織: aに新鮮な成長細胞を収集します 1.5 ML遠心チューブ, で遠心分離する 13,000 の回転数 1 分, セルを収集します, 追加 500μLのRNA抽出バッファーII, 渦とよく振る.

2. で孵化させます56for 1-3 分. サンプルの多糖類が高い場合, このステップをスキップすることをお勧めします.

3. ボルテックス 30 秒.

4. 溶解物の遠心 10 私のもの 14,000 RPM (20,000×g).

(注記: 植物材料からの多糖類は、このステップで粘着性物質をもたらす可能性があります, 後続のステップでDNAをカットできます. このステップ中にこれらの物質を除去します. 遠心分離後, 上清を新しいに移します DNA精製 カラム。)

5. 取得した上清をDNAクリーンアップカラムに追加します (毎回約650〜700μl), オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, ろ液を集めます (この時点でMicroRNAは濾液にあります).
6. ろ液の体積を正確に推定します, 追加 0.5 絶対エタノールの容積の倍. 少量の降水量がある場合, 後続の実験には影響しません. RNA精製カラムに液体を追加します, で遠心分離する 13,000 の回転数 1 分.
7. 廃棄物を廃棄し、次のステップのためにRNA精製カラムをコレクションチューブに配置します.
8. 追加 600μLの阻害剤除去バッファー, オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分, 廃棄物を捨てます, 次のステップのために、RNA精製列をコレクションチューブに戻します.
9. 追加 700洗浄バッファーμl 1 RNA精製カラムに, で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分, 遠心分離時間を適切に延長して、より乾燥膜を確保する.

(注記: 緩衝液への絶対エタノールの添加を確認します 1. エタノールの存在は、その後の実験に深刻な影響を及ぼします. したがって, 膜の乾燥が非常に重要です. 遠心分離後, 溶出前にエタノールがないことを確認してください, 廃棄物を捨てます, チューブを集めます.

洗浄バッファーで洗浄した後 1, RNA精製カラムの膜はわずかな色のみを持つ必要があります. 遠心分離後, RNA精製カラムを慎重に取り外します, エタノールの干渉を避けるために、コレクションチューブに触れないようにしてください.)

10. RNA精製柱を新しい遠心分離機に配置します, 追加 100μLの溶出緩衝液 膜に, 室温でインキュベートします 5 分 (15℃〜25℃), オーバーでの遠心 8,000 の回転数 1 分.

(注記: 50μLの溶出バッファーでRNAを溶出すると、RNA濃度が増加しますが、RNAの総収量が減少します.)

11. 前のステップを繰り返します.

注記: 新しい遠心チューブを使用して、2回目にRNAを収集できます, または元のコレクションチューブを使用してRNAの収集を続けることができます.