サルモネラ菌核酸検出キット

商品番号：AP2308004 仕様：24T/48T ストレージ：-20℃

製品導入：

サルモネラ菌は、サルモネラ症を引き起こす可能性のある一般的な食中毒性病原菌です。, 卵入り, 家禽, 肉は一般的な感染源である. この検査キットはリアルタイム蛍光定量を利用しています。 PCR 水などのサンプル中のサルモネラ菌の特定の DNA セグメントを選択的に増幅する技術, 糞便, 汚染された疑いのある食品. サンプル中のサルモネラ菌の存在は、Ct 値によって判断できます。, または、サンプル中のサルモネラ菌の汚染レベルは標準曲線によって決定できます。.

商品内容：

保管条件：

-20℃で保存, 保存期間は少なくとも 12 月.

実験運用：

1. サンプルの準備 (サンプル準備エリア)

1.1 サンプル要件:

– 口腔および総排泄腔の綿棒: 滅菌綿棒を用意します, 鳥の喉や総排出腔に挿入します, 3回回転させる, 遠沈管に入れます, 露出した部分をカットする, キャップをしっかりと閉めてください, そしてラベルを付けます. すぐに検査できるサンプルは 2 ～ 8°C で保存してください。 24 時間, すぐに検査できないサンプルは -20°C で保管してください。.

– 全血: 抗凝固剤としてEDTAを使用する, ヘパリン抗凝固薬を避ける, 新鮮な全血を使用する, または 2 ～ 8°C で保管してください。 7 日々, または-20℃以下で保管してください。 3 月, 凍結融解サイクルの繰り返しを避ける.

– 組織: 100mgを超えない新鮮な筋肉または臓器組織を摂取してください, 200～500μLの滅菌水を使用して組織ホモジネートを調製します, その後のサンプル前処理に進みます.

1.2 サンプルの準備:

によると、 “GB 4789.4-2016 国家食品安全基準 – 食品微生物検査 – サルモネラ検査” セクション 5.1 またはその他の該当する規格, 事前濃縮によりサンプルを処理する, 後で使用するために細菌懸濁液を準備します. 重さ25g (mL) サンプルを採取し、225mL の緩衝ペプトン水が入った滅菌均質化カップに置きます。 (BPW). 8000rpm/min ～ 10000rpm/min で 1 ～ 2 分間ホモジナイズするか、BPW 225mL が入った滅菌ホモジナイズバッグに入れてストマッカーで 1 ～ 2 分間ホモジナイズします。. サンプルが液体の場合, 均質化は必要ありません; よく振ってください. pH測定が必要な場合, 1mol/mLの滅菌NaOHまたはHClを使用してpHを6.8±0.2に調整します。無菌操作を行ってサンプルを500mL三角フラスコに移します。. ホモジナイズバッグを使用する場合, 直接栽培も可能. 36°C±1°Cで8時間から18時間インキュベートします. サンプルが冷凍品の場合, 解凍は45℃以下で15分以内、または2℃～5℃で18時間以内にしてください。Sanshi Biologicalの資料を参照してください。 “総DNA/RNA抽出キット マニュアル” (カタログ: DP201) または、処理されたサンプルからの核酸抽出の関連要件を満たすその他の核酸抽出キット/方法. 抽出した核酸サンプルをアイスボックスに入れ、できるだけ早く検出を実行します。. 4°C以下で保管してください 7 数日または -20°C での保管期間を超えないこと 6 月.

2. 反応系の準備 (反応エリア)

2.1 キットの各コンポーネントを取り出します, 室温で完全に解凍する, 遠心分離機用 10 秒, チューブ壁とチューブキャップ内の液体をチューブの底まで遠心分離します。. サンプル量に応じて反応液を調製します (n+2, ここで、n はサンプル数です, セットアップすることをお勧めします 1 ポジティブコントロールと 1 各実験のネガティブコントロール). 具体的な作り方: 取る (n+2) Sal プレミックス溶液を含む反応チューブ, 11.5μLのPiHV反応溶液を各チューブに加えます, ピペットを使用して完全に混合します, 23ウェルあたり µL, そしてクーラーに保管してください.

2.2 次に、ネガティブコントロール 2μL を順次加えます。, 抽出されたサンプル核酸, 反応液にSal陽性コントロールを添加. チューブのキャップを閉めます, 記録を作る, 各反応の総量は 25μL です。. 十分に混ぜ合わせてください, 遠心分離機用 10 秒, PCR装置で増幅実験を実行します.

3. PCR増幅 (増幅および生成物分析エリア)

95℃での予備変性 2 分; 95℃での変性 10 秒, 60℃でのアニーリングと伸長 35 秒, 40 サイクル. 60℃で蛍光シグナルを収集. FAM 蛍光チャンネルの選択 (ABIシリーズなどのリアルタイム蛍光定量PCR装置を使用, 必要に応じて, メーカーに問い合わせるか、ROX 補正色素を追加してください; さもないと, 通常の手順に従ってください).

4. 結果の解釈

4.1 実験の有効性の条件:

ポジティブコントロール: FAMチャンネルのCt値 < 28 そして、 “S”-整形された増幅曲線. ネガティブコントロール: Ct値なし、またはCt値≧ 40 そしていいえ “S”-整形された増幅曲線. 実験結果はこれらの条件下で有効です; さもないと, 実験を繰り返す. 繰り返しテストしても無効な場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.

4.2 サンプル結果の解釈:

Ct値≦ 35 と “S”-形作られた増幅曲線はサルモネラ菌核酸に対して陽性であると考えられます. 間のCt値 35 そして 40 疑わしいと考えられている, そして再テストが推奨されます. これは、標準以下の核酸抽出または強力な阻害物質の存在が原因である可能性があります。 (残留消毒剤など, 抗凝固剤, 等). 核酸の抽出と増幅のためにサンプルを再処理することをお勧めします。. 初め, 除外する “偽陽性” エアロゾル汚染によって引き起こされる結果, その後、核酸を再抽出してテストします。. もし, エアロゾル汚染を除外した後, FAM チャネルの再テストで Ct 値が示される < 35 明確な増幅曲線, それはポジティブだと考えられています; さもないと, それは否定的だと考えられます.

Ct値なし、またはCt値≧ 40 そしていいえ “S”-形作られた増幅曲線はサルモネラ菌核酸に対して陰性であると考えられます.

予防：

• 汚染を防ぐために, 実験は厳密に分割する必要があります, 人的要因による相互汚染を避けるために、パーティション間の物理的な隔離が推奨されます。. 実験中は白衣とラテックス手袋を着用してください, さまざまな領域でツールを独立して使用する, 必要に応じて手袋と白衣を交換する. PCR後, すぐに蓋を開けないでください; エアロゾル汚染を最小限に抑えるために十分に冷却してから開けてください。.
• 使用前に試薬を完全に解凍してください, ただし、凍結融解を繰り返すことは避けてください。. キットに付属のPCR反応チューブは0.2mLです。; 交換が必要な場合, 完全に解凍してから移す. 試薬の調製とサンプルの添加については指示に厳密に従ってください。. ワークステーション, 遠心分離機, ピペット, その他の器具は塩素含有消毒剤で定期的に消毒する必要があります。, アルコール, 核酸除染剤, または紫外線.
• 陰性の結果は、必ずしも宿主がウイルスに感染していないことを意味するわけではありません. サンプルの品質が悪い, ウイルス負荷が低い, または強力な阻害物質の存在 (アルコールなどの, 消毒剤, 抗凝固剤, 等) 核酸抽出が失敗する可能性があります (検出) そして “ネガティブ” 結果. 結果の解釈基準に従ってください, 疑わしい結果が出た場合, まずエアロゾル汚染を除外する. 他にご質問がある場合, メーカーの技術担当者にお問い合わせください.
• この製品は1回限りの使用です. 試薬内の成分は自然光に敏感です; 梱包および保管中に光への曝露を避ける. 梱包後, 凍結融解を繰り返さないでください. 科学研究のみに使用する; 臨床診断やその他の目的ではありません.