Kit de detección de ácidos nucleicos de Salmonella

Artículo No：AP2308004 Especificación：24t/48t Almacenamiento：-20℃

Introducción del producto：

Salmonella is a common foodborne pathogenic bacterium that can lead to salmonellosis, with eggs, aves de corral, and meat being common sources of transmission. This test kit utilizes real-time fluorescent quantitative PCR technology to selectively amplify specific DNA segments of Salmonella in samples such as water, feces, and suspected contaminated food. The presence of Salmonella in the sample can be determined by the Ct value, or the contamination level of Salmonella in the sample can be determined through a standard curve.

Contenido del producto：

Condiciones de almacenaje：

Almacenar a -20 ℃, la vida útil es al menos 12 meses.

Operación experimental：

1. Preparación de la muestra (Área de preparación de muestras)

1.1 Requisitos de muestra:

– Hisopos orales y cloacales: Tome un hisopo de algodón esterilizado., insértelo en la garganta o cloaca del pájaro, girar tres veces, colóquelo en un tubo de centrífuga, cortar la parte expuesta, cerrar bien la tapa, y etiquetarlo. Las muestras que puedan analizarse rápidamente deben almacenarse entre 2 y 8 °C dentro de un plazo 24 horas, y las muestras que no puedan analizarse rápidamente deben almacenarse a -20°C.

– Sangre pura: Utilice EDTA como anticoagulante., evitar el anticoagulante heparina, usar sangre entera fresca, o almacenar a 2-8°C por no más de 7 días, o almacenar a -20°C por no más de 3 meses, evitando ciclos repetidos de congelación y descongelación.

– Tejido: Tome tejido muscular o de órganos fresco que no exceda los 100 mg., Utilice 200-500 μl de agua estéril para preparar el homogeneizado de tejido., y continuar con la preparación posterior de la muestra.

1.2 Preparación de la muestra:

According to the “GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard – Food Microbiological Examination – Salmonella Test” section 5.1 or other applicable standards, process the sample by pre-enrichment, and prepare the bacterial suspension for later use. Weigh 25g (mililitros) of the sample and place it in a sterile homogenization cup containing 225mL of Buffered Peptone Water (BPW). Homogenize at 8000rpm/min to 10000rpm/min for 1min to 2min or place it in a sterile homogenization bag containing 225mL of BPW and homogenize with a stomacher for 1min to 2min. If the sample is liquid, homogenization is not necessary; shake it well. If pH measurement is required, adjust the pH to 6.8±0.2 using 1mol/mL sterile NaOH or HCl.Perform aseptic operations to transfer the sample to a 500mL conical flask. If using a homogenization bag, direct cultivation can be performed. Incubate at 36°C±1°C for 8h to 18h. If the sample is a frozen product, thaw at temperatures below 45°C for no more than 15min or at 2°C to 5°C for no more than 18h.Refer to the Sanshi Biological “Total DNA/Kit de extracción de ARN Manual” (Catalogar: DP201) or other nucleic acid extraction kits/methods that meet relevant requirements for nucleic acid extraction from processed samples. Place the extracted nucleic acid samples in an icebox and perform the detection as soon as possible. Almacenar a 4°C por no más de 7 días o a -20°C durante no más de 6 meses.

2. Preparación del sistema de reacción (Área de reacción)

2.1 Saca cada componente del kit., descongelar completamente a temperatura ambiente, centrífuga para 10 segundos, y centrifugar el líquido dentro de la pared del tubo y la tapa del tubo hasta el fondo del tubo.. Prepare la solución de reacción de acuerdo con la cantidad de muestra. (n+2, donde n es el número de muestras, se recomienda configurar 1 control positivo y 1 control negativo para cada experimento). Método de preparación específico: Llevar (n+2) reaction tubes containing Sal premix solution, agregue 11,5 µl de solución de reacción de PiHV a cada tubo, use una pipeta para mezclar bien, 23µL por pocillo, y guardar en una hielera.

2.2 Luego agregue secuencialmente 2 μL de control negativo., ácido nucleico de muestra extraída, and Sal positive control to the reaction solution. Cerrar la tapa del tubo, grabar un disco, y el volumen total de cada reacción es 25μL. Mezclar bien, centrífuga para 10 segundos, y realizar experimentos de amplificación en el instrumento de PCR.

3. Amplificación por PCR (Área de Amplificación y Análisis de Productos)

Predesnaturalización a 95°C para 2 minutos; Desnaturalización a 95°C para 10 segundos, recocido y extensión a 60°C para 35 segundos, 40 ciclos. Recoge señales de fluorescencia a 60 °C.. Elija el canal de fluorescencia FAM (Utilice instrumentos de PCR cuantitativa de fluorescencia en tiempo real, como la serie ABI., si necesario, póngase en contacto con el fabricante o agregue tinte corrector ROX; de lo contrario, seguir los procedimientos normales).

4. Interpretación de resultados

4.1 Condiciones para la validez del experimento:

Positive control: Ct value in the FAM channel < 28 and the appearance of an “S”-curva de amplificación en forma. Control negativo: Sin valor Ct o valor Ct ≥ 40 y no “S”-curva de amplificación en forma. The experiment results are valid under these conditions; de lo contrario, repetir el experimento. If repeated testing is still invalid, póngase en contacto con el personal técnico del fabricante..

4.2 Interpretación de los resultados de las muestras:

Valor CT ≤ 35 with an “S”-shaped amplification curve is considered positive for Salmonella nucleic acid. Valor Ct entre 35 y 40 se considera sospechoso, and retesting is recommended. This may be due to substandard nucleic acid extraction or the presence of strong inhibitory substances (such as residual disinfectants, anticoagulantes, etc.). It is suggested to reprocess the sample for nucleic acid extraction and amplification. Primero, exclude “falso positivo” results caused by aerosol contamination, then re-extract and test the nucleic acid. Si, after excluding aerosol contamination, the FAM channel retest shows a Ct value < 35 con una curva de amplificación clara, se considera positivo; de lo contrario, se considera negativo.

Sin valor Ct o valor Ct ≥ 40 y no “S”-shaped amplification curve is considered negative for Salmonella nucleic acid.

Precauciones：

• Para prevenir la contaminación, el experimento debe estar estrictamente dividido, y se prefiere el aislamiento físico entre particiones para evitar la contaminación cruzada debido a factores humanos. Use batas de laboratorio y guantes de látex durante el experimento., utilizar herramientas de forma independiente en diferentes áreas, cambiarse guantes y batas de laboratorio cuando sea necesario. Después de la PCR, no abra la tapa inmediatamente; Ábralo después de enfriarlo lo suficiente para minimizar la contaminación por aerosoles..
• Descongelar completamente los reactivos antes de su uso., pero evite ciclos repetidos de congelación y descongelación.. Los tubos de reacción de PCR incluidos en el kit son de 0,2 ml.; si es necesario un reemplazo, transferir después de la descongelación completa. Siga estrictamente las instrucciones para la preparación de reactivos y la adición de muestras.. Estaciones de trabajo, centrífugas, pipetas, y otros instrumentos deben desinfectarse periódicamente con desinfectantes que contengan cloro, alcohol, agentes de descontaminación de ácidos nucleicos, o luz ultravioleta.
• Un resultado negativo no significa necesariamente que el huésped no esté infectado con el virus.. Mala calidad de la muestra, baja carga de virus, o la presencia de sustancias inhibidoras fuertes (como el alcohol, desinfectantes, anticoagulantes, etc.) puede resultar en una extracción fallida de ácido nucleico (detección) y un “negativo” resultado. Seguir los criterios de interpretación de resultados., y cuando hay resultados sospechosos, primero excluir la contaminación por aerosoles. Si hay otras preguntas, contactar con el personal técnico del fabricante.
• Este producto es para un solo uso.. Los componentes del reactivo son sensibles a la luz natural.; Evite la exposición a la luz durante el embalaje y almacenamiento.. Después del embalaje, no congelar y descongelar repetidamente. Sólo para uso en investigación científica.; no para diagnóstico clínico u otros fines.