製品概要
NR (EC 1.7.1.3) 植物に広く存在する酵素です. 硝酸態窒素をアンモニア態窒素に変換する際に重要な役割を果たし、誘導性酵素でもあります。, 作物の収量と品質に影響を与える. NRは硝酸塩から亜硝酸塩への還元を触媒します: NO3- + NADH+H+ → NO2- + NAD+ + H2O. 酸性条件下では, 生成されたNO2- ジアゾ化反応に参加してマゼンタ色の化合物を形成する可能性がある. この化合物には吸収ピークがあります。 540 nm, と吸光度の変化 540 nm は酵素活性を表すために使用できます.
キットのコンポーネント
- インデューサー原液: 50 mL× 1 ボトル
- 抽出液: 30 mL× 1 ボトル
- 試薬 1: 12 mL× 1 ボトル
- 試薬 2: パウダー× 2 バイアル
- 試薬 3: 15 mL× 1 ボトル
- 試薬 4: 15 mL× 1 ボトル
- 標準: 1 mL× 1 バイアル
溶液の準備
- インデューサー溶液: インデューサー原液を蒸留水で10倍に希釈して使用してください。. 取る 10 インデューサー原液 mL を加えて加えます。 90 蒸留水 mL. 十分に混ぜ合わせてください. 使用する前に新しく準備してください.
- 試薬 2: 追加 1 蒸留水 mL. 分注して-20℃で保存. 保管できるのは、 2 -20℃で数週間. ご使用の前に, 試薬2を蒸留水で50倍に希釈. 取る 10 μL の試薬 2 を加え、 490 蒸留水 μL. よく混ぜます.
- 標準: を準備します。 0.1 μmol/mL 亜硝酸ナトリウム標準液を希釈して得ます。 10 μmol/mL亜硝酸ナトリウム標準液を蒸留水で100倍して使用.
ノート
- 吸光度がそれより大きい場合 0.8, サンプルを抽出溶液で希釈します. 計算式に応じて希釈倍率を調整することに注意してください。.
- 実験用のサンプル分析表に記載されている試薬の添加順序に厳密に従ってください。.
実験手順
私. サンプル処理
-
組織の前処理:
- 適量のインデューサー溶液をビーカーに加えます. 新鮮なサンプルを洗浄します, 濾紙で乾燥させます, そしてそれらを誘導剤溶液に入れます (水没するのに十分な). 暗所で培養します 2 時間. サンプルを除去する, 濾紙で乾燥させます, -20℃で凍結させます 30 分. サンプルを解凍し、濾紙で再度乾燥させます. (必要に応じて導入治療を行う. 一般的に, 導入治療は必要ありません. 実験前の結果で活性が示されなかった場合, 導入治療が必要です。)
- およその重さを量る 0.1 gのサンプルを加えます 1 組織重量の比率に応じた抽出溶液のmL (g) 抽出液量まで (mL) の 1:5 に 10. 氷浴中で粉砕する, で遠心分離する 8000 g, 4℃ 10 分, そして上清を回収します. 試験のために上清を氷上に保管します.
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細胞または細菌の前処理:
- 細胞または細菌のサンプルを遠心分離管に収集し、上清を廃棄します。. 追加 1 抽出溶液 mL あたり 5 数百万の細胞または細菌. 細菌または細胞を超音波処理する (力 200 W, 超音波処理 3 秒, 間隔 10 秒, 繰り返す 30 回). で遠心分離します。 8000 g, 4℃ 10 分, 上清を収集し、試験のために氷上に保管します.
Ⅱ. アッセイ手順
- 可視分光光度計を少なくとも一定時間予熱します。 30 分, 波長を調整して 540 nm, 蒸留水でゼロにする.
- サンプルアッセイ:
| 試薬名 | 試験管 | コントロールチューブ | 標準チューブ | ブランクチューブ |
|---|---|---|---|---|
| サンプル | 100 μL | – | – | – |
| 0.1 μmol/mL標準液 | – | – | 100 μL | – |
| 蒸留水 | – | 375 μL | – | 475 μL |
| 試薬 1 | 375 μL | – | 375 μL | – |
| 試薬 2 | 125 μL | 125 μL | 125 μL | 125 μL |
| 試薬 3 | 250 μL | 250 μL | 250 |
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