細菌の全RNA (プラス) 抽出キット

1. 試薬キットのコンポーネント

仕様	50T	100T
猫. いいえ.	SN0321-D	SN0322-D
RNA抽出カラム (セット)	50（套）	100（套）
DNAクリーンアップカラム (セット)	50（套）	100（套）
RNA抽出 バッファI	30ミリリットル	2× 30 ミリリットル
阻害剤除去バッファー	30ミリリットル	2×30 ml
洗浄バッファー 1	15 ミリリットル	2×15 ml
溶出バッファー	20ミリリットル	2×20 ml
Lysozyme	5ミリリットル	2x5ml
取扱説明書	1	1

2. ストレージ

この試薬キットは、室温で保管する必要があります (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 月. Lysozyme contains a preservative, allowing for transportation at room temperature; しかし, for long-term storage, it should be stored at -20℃

3. 試薬キットを使用するための指示

3.1 このキットは分子生物学の研究目的を目的としており、疾患の診断や治療に使用すべきではありません.

3.2 キットの一部のコンポーネントには刺激物が含まれています; 必要な予防策を講じることをお勧めします (保護服やゴーグルを着用するなど).

3.3 このキットを使用するには、高速遠心分離機などの追加の機器が必要です, 水浴 (メタルバス), 渦ミキサー, 無水エタノール, 液体窒素, クロロホルム, 滅菌脱イオン水, およびEPチューブ.

4. 試薬キットの紹介

This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.

The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (核RNAおよび細胞質RNAを含む) 内で 1 時間. 抽出されたRNAは、RTに直接使用できます-PCR, ノーザンブロット, 等. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.

5. 実験原則と手順

6. 抽出プロセス

実験を開始する前の注意事項:

あ. ご使用の前に, add the specified amount of absolute ethanol to 洗浄バッファー 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.

B. 溶出バッファーはaです 0.1X TEソリューション 最小限のEDTAを含む. If EDTA may impact subsequent experiments, it is recommended to replace the Elution Buffer with sterile deionized water.

1. サンプル処理:

あ. Gram-positive bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 の回転数 2 分, collect bacterial cells (1.53 ミリリットル), 上清を捨てる, 追加 100μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, and incubate at room temperature for 15-30 分.

B. Gram-negative bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 の回転数 2 分, collect bacterial cells (1.53 ミリリットル), 上清を捨てる, 追加 10μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, and incubate at room temperature for 3-5 分.

2.追加 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.

3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, で遠心分離する 13,000 の回転数 2 分, ろ液を集めます (RNAは濾液に存在します).

4. Accurately estimate the volume of the filtrate, 追加 0.5 times the volume of absolute ethanol, 十分に混ぜる; if precipitation occurs, 後続の実験には影響しません.

5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (approximately 650~700μl each time), centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, discard the collected waste liquid, and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.

6. ステップを繰り返します 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, discard the waste liquid and the collection tube.

7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, 追加 600μl Inhibitor Removal Buffer, centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分, discard the waste liquid, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.

8. 追加 700μl Wash Buffer 1 to the RNA extraction purification column, で遠心分離する 14,000 RPM (20,000×g) のために 2 分, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.

(注記: Confirm that absolute ethanol has been added to Wash Buffer 1. エタノールの存在は、その後の実験に深刻な影響を及ぼします, so membrane drying is crucial. 遠心分離後, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.

洗浄バッファーで洗浄した後 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. 遠心分離後, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)

9. Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, drip 100 μl Elution Buffer onto the membrane, 室温でインキュベートします 5 分 (15°C~25°C), centrifuge at more than 8,000 の回転数 1 分.

(注記: RNAを溶出します 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

10. 前のステップを繰り返します.

(注記: 新しい遠心チューブを使用して、2回目にRNAを収集できます, または元のコレクションチューブを使用してRNAの収集を続けることができます.)