- Bestandteile des Reagenzienkits
| Spezifikationen | 50T | 100T |
| Katze. NEIN. | SN0321-D | SN0322-D |
| RNA -Extraktionssäulen (Satz) | 50（套） | 100（套） |
| DNA Clean-Up Columns (Satz) | 50（套） | 100（套） |
| RNA Extraction Buffer I | 30ml | 2× 30 ml |
| Inhibitorentfernungspuffer | 30ml | 2×30 ml |
| Waschpuffer 1 | 15 ml | 2×15 ml |
| Elutionspuffer | 20ml | 2× 20 ml |
| Lysozym | 5ml | 2x5ml |
| Bedienungsanleitung | 1 | 1 |
- Lagerung
Dieses Reagenzienkit sollte bei Raumtemperatur gelagert werden (15-25℃) in a dry environment and can be preserved for 12 Monate. Lysozyme contains a preservative, allowing for transportation at room temperature; Jedoch, for long-term storage, it should be stored at -20℃
- Anweisungen zur Verwendung des Reagenzienkits
3.1 Dieses Kit ist für molekularbiologische Forschungszwecke bestimmt und sollte nicht zur Diagnose oder Behandlung von Krankheiten verwendet werden.
3.2 Einige Bestandteile des Kits enthalten Reizstoffe; Es ist ratsam, die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen zu treffen (wie das Tragen von Schutzkleidung und Schutzbrillen).
3.3 Die Verwendung dieses Kits erfordert zusätzliche Ausrüstung wie eine Hochgeschwindigkeitszentrifuge, Wasserbad (Metallbad), Vortexmixer, Wasserfreies Ethanol, flüssiger Stickstoff, Chloroform, steriles entionisiertes Wasser, und EP-Röhren.
- Einführung in das Reagenzienkit
This RNA purification kit provides a rapid and efficient purification solution for bacterial RNA, suitable for most bacterial tissues. The kit employs DNA removal technology to effectively eliminate genomic DNA, and the resulting RNA samples typically do not require on-column digestion, reducing the risk of RNA degradation.
The RNA Fast Purification Kit allows for the extraction of total bacterial RNA (einschließlich nuklearer RNA und zytoplasmatischer RNA) innerhalb 1 Stunde. Die extrahierte RNA kann direkt für RT verwendet werden-PCR, Northern Blot, usw. The entire purification process does not involve toxic reagents such as phenol-chloroform, making the RNA purification kit well-suited for various sample types.
- Experimentelle Prinzipien und Verfahren
- Extraktionsprozess
Vorsichtsmaßnahmen vor Beginn des Experiments:
A. Vor Gebrauch, Fügen Sie die angegebene Menge an absolutem Ethanol hinzu Waschpuffer 1 as indicated on the reagent bottle label, and mark with a check to indicate the addition of absolute ethanol.
B. Elutionspuffer ist ein 0.1x TE-Lösung enthält eine minimale Menge EDTA. If EDTA may impact subsequent experiments, Es wird empfohlen, den Elutionspuffer durch steriles entionisiertes Wasser zu ersetzen.
- Probenverarbeitung:
A. Gram-positive bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 U/min für 2 Protokoll, collect bacterial cells (1.53 ml), Den Überstand verwerfen, hinzufügen 100μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, und bei Raumtemperatur inkubieren für 15-30 Protokoll.
B. Gram-negative bacteria: Centrifuge the bacterial suspension at 4℃, 12,000 U/min für 2 Protokoll, collect bacterial cells (1.53 ml), Den Überstand verwerfen, hinzufügen 10μl Lysozyme (10mg/ml), thoroughly mix the bacterial cells, und bei Raumtemperatur inkubieren für 3-5 Protokoll.
2.Hinzufügen 400μl RNA Extraction Buffer I, vortex to mix thoroughly.
3. Transfer the lysate to a DNA clearance purification column, Zentrifuge bei 13,000 U/min für 2 Protokoll, collect the filtrate (RNA is present in the filtrate).
4. Accurately estimate the volume of the filtrate, hinzufügen 0.5 times the volume of absolute ethanol, gründlich mischen; if precipitation occurs, it does not affect subsequent experiments.
5. Add the obtained liquid to the RNA extraction purification column (jedes Mal ungefähr 650 ~ 700 μl), Zentrifuge um mehr als 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die gesammelte Abfallflüssigkeit, and reinsert the collection tube into the RNA extraction purification column for the next step.
6. Schritt wiederholen 5, add the remaining liquid to the RNA extraction purification column, Zentrifuge um mehr als 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit und das Sammelröhrchen.
7. Place the RNA extraction purification column into a new collection tube, hinzufügen 600μl Inhibitor Removal Buffer, Zentrifuge um mehr als 8,000 U/min für 1 Minute, Entsorgen Sie die Abfallflüssigkeit, and reinsert the RNA extraction purification column into the tube for the next step.
8. Hinzufügen 700μl Wash Buffer 1 to the RNA extraction purification column, Zentrifuge bei 14,000 U/min (20,000×g) für 2 Protokoll, extend the centrifugation time appropriately to ensure the membrane is thoroughly dried.
(Notiz: Bestätigen Sie, dass das absolute Ethanol hinzugefügt wurde, um den Puffer zu waschen 1. The presence of ethanol has a serious impact on subsequent experiments, so membrane drying is crucial. Nach Zentrifugation, ensure there is no ethanol present before elution. Discard the waste liquid and the collection tube.
After washing with Wash Buffer 1, the membrane on the RNA extraction purification column should only have a slight color. Nach Zentrifugation, carefully remove the RNA extraction purification column without touching the collection tube to ensure no ethanol interference.)
- Place the RNA extraction purification column into a new centrifuge tube, tropfen 100 μl Elution Buffer onto the membrane, bei Raumtemperatur inkubieren für 5 Protokoll (15°C~25°C), Zentrifuge um mehr als 8,000 U/min für 1 Minute.
(Notiz: Elusionsrna mit 50 μl Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)
- Wiederholen Sie den vorherigen Schritt.
(Notiz: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.)
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