Kit di analisi dell'attività di eliminazione dei radicali degli alberi Solarbio ABTS

Panoramica del Prodotto

Contenuto del prodotto:

Assicurarsi che il volume del reagente corrisponda al volume della soluzione nel flacone prima dell'uso. Per domande, gentilmente contattare Solarbio personale tempestivamente.

Preparazione della soluzione:

1. Reagente II: Prima dell'uso, aggiungere 3 ml di acqua distillata e sciogliere completamente. Qualsiasi reagente non utilizzato può essere conservato a -20℃ per due settimane.
2. Preparazione della soluzione di lavoro del reagente III: Posizionare il liquido nel tubo EP fornito. Preparare la soluzione di lavoro in base al rapporto del Reagente III (μL) all'acqua distillata (ml) = 1 μL: 12 ml. I reagenti non utilizzati devono essere conservati a 4°C.
3. Preparazione della soluzione di lavoro del reagente IV: Conservare il Reagente IV separatamente a -20℃. Prima dell'uso, preparare la soluzione di lavoro in base al numero di campioni e al rapporto tra Reagente V e Reagente I (V: V) = 1:9. Il reagente non utilizzato deve essere conservato a -20℃.
4. Reagente V: Posizionare la polvere contenente 5 mg di vitamina C nel tubo EP fornito. Aggiungere 2.8 mL di soluzione estratta prima dell'uso, e agitare bene per scioglierlo. Preparare un 10 mmol/L di soluzione di vitamina C da utilizzare come controllo positivo. Conservare a 4 ℃ per una settimana.
5. Preparazione della soluzione di lavoro ABTS: Prima dell'uso, preparare la soluzione di lavoro ABTS in base alla quantità richiesta per il test. La proporzione del reagente I: Reagente II: Soluzione di lavoro Reagente III (V:V:V) = 76:5:4. Preparare e conservare in una stanza buia a temperatura ambiente. Utilizzare entro 30 minuti.

Descrizione del prodotto:

1. Valutazione della capacità antiossidante: Il metodo ABTS è ampiamente utilizzato per valutare la capacità antiossidante delle sostanze idrofile e lipofile.
2. Formazione del Radicale ABTS: L'ABTS si ossida per formare un radicale ABTS cationico blu-verde stabile con picchi di assorbimento a 405 nm o 734 nm.
3. Diminuzione dell'assorbanza: Quando la sostanza testata viene aggiunta alla soluzione radicale ABTS, con esso reagisce la componente antiossidante, causando una diminuzione dell'assorbanza a 405 nm.
4. Scavenging proporzionale: La variazione dell'assorbanza è direttamente proporzionale al grado di eliminazione dei radicali liberi entro un certo intervallo.
5. Quantificazione dello scavenging: Questo kit misura la capacità del campione di eliminare i radicali ABTS quantificando la diminuzione dell'assorbanza.

Nota: Prima del test, condurre esperimenti preliminari con 2-3 campioni che mostrano differenze attese significative. Se l'assorbanza del campione non rientra nell'intervallo di misurazione, prendere in considerazione la possibilità di diluire o aumentare la dimensione del campione per il test.

Reagenti e attrezzature necessari ma non forniti:

Bagnomaria a temperatura costante, spettrofotometro, 1 Cuvetta di vetro da ml, centrifuga da tavolo, mortaio/macinatore, scatola di asciugatura, 30Setaccio da ~50 mesh, e acqua distillata.

Procedura:

IO. Estrazione del campione: (Il numero di campioni può essere regolato di conseguenza, e fare riferimento alla letteratura per proporzioni specifiche)

1. Preparazione di campioni di tessuti vegetali: Asciugare i campioni freschi a 60 ℃ fino a peso costante, macinare in un mortaio (o smerigliatrice), e filtrare attraverso un setaccio da 30~50 maglie. Pesare approssimativamente 0.05 g di campioni, aggiungere 1 mL di soluzione di estrazione, e incubare in un bagnomaria a 40 ℃ per 30 min. Centrifugare a 10000 giri al minuto per 10 minuto a temperatura ambiente, raccogliere il surnatante e conservarlo in ghiaccio per i test.
2. Vino rosso, Succo di frutta, e altri campioni liquidi: Prendere 100 μL di soluzione campione e aggiungere 900 μL di soluzione di estrazione. Miscela vorticosa, centrifugare a temperatura ambiente, 10000 giri al minuto per 10 min, raccogliere il surnatante e conservarlo in ghiaccio per i test.
3. Estrazione o droga: Preparare una certa concentrazione con la soluzione di estrazione, ad esempio 5 mg/ml.

Nota: La capacità dei vari campioni di eliminare i radicali liberi ABTS può variare in modo significativo. Per garantire la precisione, regolare i campioni in base ai risultati preliminari.

II. Fasi di determinazione:

1. Preriscaldare lo spettrofotometro per oltre 30 minuti, impostare la lunghezza d'onda su 405 nm, e zero con acqua distillata.
2. Preparazione del controllo positivo: Preparare un 10 mmol/l di soluzione di vitamina C con soluzione di estratto. Per una relazione lineare, preparare 1, 0.8, 0.6, 0.4, 0.2, E 0.1 mg/mL di soluzioni di vitamina C. Per un controllo positivo con un tasso di eliminazione di circa 90%, preparare soluzioni di vitamina C più grandi di 1.5 mmol/l.
3. Tavolo operativo: Aggiungere i seguenti reagenti in una piastra da 96 pozzetti o in una provetta EP, rispettivamente:

Dopo un'accurata miscelazione, incubare nell'oscurità per 6 minuto a temperatura ambiente. Misurare l'assorbanza a 405 nm. Registrare i valori di assorbanza per la provetta vuota, tubo di controllo, provetta di controllo positivo, e provetta come AB, AC, APC, e AT rispettivamente. Il tubo vuoto deve essere testato 1-2 volte.

III. Calcolo del tasso di eliminazione dei radicali liberi ABTS:

1. Definizione della curva standard: La formula per il tasso di eliminazione dei radicali liberi del controllo positivo: ABTS Tasso di eliminazione dei radicali liberi DVC% = [(AB-APC) ÷AB] × 100%
2. Formula di calcolo del tasso di eliminazione dei radicali liberi del campione: Tasso di eliminazione dei radicali liberi ABTS D% = [AB – (AT-AC)] ÷AB] × 100%.

Nota:

1. Confrontare la capacità di scavenging di diversi campioni, si consiglia di aggiungere lo stesso volume di campioni allo stesso lotto, aggiustamento in base ai risultati pre-sperimentali. Durante il confronto, regolare i campioni in base ai risultati, confrontando i tassi di clearance alla stessa concentrazione (rapporto di diluizione).
2. I campioni devono essere prelevati e testati lo stesso giorno.

Esempio sperimentale:

Prendere 0.05 g di peperoncino e aggiungere 1 ml di soluzione di estrazione da omogeneizzare. Dopo la centrifugazione, raccogliere il surnatante e procedere secondo le fasi di determinazione. Calcolare il tasso di eliminazione: D% = [AB – (AT-AC)] ÷AB] × 100% = [1.330-(0.468-0.022)]÷ 1.330×100% = 66.466%

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