Miscela qPCR Sanshibio 2× sonde

2× Miscela qPCR sonda

oggetto numero：EH002 Specificazione：1Ml Storage: Conservare a -20 ° C.

Introduzione al prodotto：

Questo prodotto è un reagente specializzato per QPCR in tempo reale usando il metodo della sonda. Contiene un enzima a caldo blocco di anticorpi che sopprime efficacemente l'amplificazione non specifica causata dalla formazione di Dimer di primer o di primer a basse temperature, migliorando così la specificità della reazione di amplificazione. Questo prodotto presenta un'elevata efficienza di amplificazione e sensibilità al rilevamento, consentendo la generazione di una robusta curva standard in un ampio intervallo di quantificazione, consentendo una quantificazione accurata. Inoltre, è compatibile con varie fluorescenza quantitativa PCR Strumenti, compresi quelli di Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche, e altri marchi domestici.

Contenuto del prodotto：

Nota：Il colorante di riferimento ROX può essere ottenuto separatamente o tramite il produttore per correggere le discrepanze del segnale di fluorescenza inter-well negli amplificatori PCR in tempo reale di alcune società. Il colorante di riferimento ROX I è adatto per ABI PRISM 7000/7700/7300/7900HT e STEP ONE Plus Sistemi PCR in tempo reale, eccetera. ROX RIFERIMENTO DYE II è adatto per 7500 Sistema PCR in tempo reale, 7500 Sistema PCR in tempo reale veloce, Stratagene MX3000P, Mx3005P, e MX4000, eccetera. La concentrazione finale del colorante di riferimento ROX I e II è 1 ×. Amplificatori PCR quantitativi di fluorescenza in tempo reale come LightCycler, Termal Cycler Dice DADE Real Time System II, e il sistema Smart Cycler non richiede l'uso del colorante di riferimento ROX.

Magazzinaggio:

Conservare a -20 ° C., con una durata minima di conservazione di 12 mesi.

Definizione dell'attività:

Usando il DNA dello sperma Mahi-Mahi attivato come modello/primer, L'attività è definita come 1 unità (U) di materiale insolubile acido incorporato, Assumendo 10 nmol di nucleotidi all'interno 30 minuti a 74 ° C..

Controllo di qualità:

Questo prodotto ha subito test di qualità ed è privo di attività di endonucleasi di deossiribonucleasi, Attività di esonucleasi di deossiribonucleasi, e contaminazione da ribonucleasi. Il contenuto residuo del DNA genomico ospite è di seguito 10 copie.

Usi del prodotto:

Fluorescenza in tempo reale quantitativo singleplex o multiplex (2-4 canali) qPCR (Metodo della sonda) amplificazione di DNA o cDNA; quantificazione assoluta qpcr.

Istruzioni per l'uso:

• Equilibra i reagenti richiesti a temperatura ambiente fino a quando non si dissolvono completamente, mescolare delicatamente bene (Non vortice), Utilizzare dopo una breve centrifugazione per prevenire un'eccessiva formazione di bolle, ed evitare i cicli di congelamento ripetuti. Se usato frequentemente, Conservare a 4 ° C.. Preparare la miscela di reazione PCR secondo i componenti elencati di seguito (Preparare la miscela di reazione su una scatola di ghiaccio):

Nota：Le quantità di ciascun componente nel sistema di reazione possono essere regolate in base ai requisiti effettivi. Gli utenti devono decidere se aggiungere la tintura di riferimento ROX in base al modello effettivo utilizzato.

• Generalmente, Un metodo in due fasi può essere utilizzato per la reazione; Se l'amplificazione in due fasi non è soddisfacente, È possibile utilizzare un metodo in tre fasi per impostare il programma di reazione PCR.

Nota: Le condizioni di reazione possono essere regolate e ottimizzate in base ai requisiti effettivi.

• Dopo che la reazione è completa, analizzare i risultati sperimentali. Per metodi di analisi dettagliati, Fare riferimento al manuale operativo dello strumento di amplificazione PCR.

Precauzioni:

1. La concentrazione dei primer utilizzati può essere regolata all'interno dell'intervallo di 0.2-1.0 μm, e il modello DNA può essere adeguatamente regolato in base alla sua concentrazione.
2. Scegli una ricottura appropriata (estensione) temperatura in base al design del primer. Tipicamente, Il valore TM dei primer è progettato per essere di circa 60 ° C. Per primer con temperature di ricottura più basse o per amplificare frammenti lunghi che superano 200 p.b, Si consiglia un metodo in tre fasi.
3. La concentrazione della sonda utilizzata può essere ottimizzata nell'intervallo di 0.1-0.4 μm. Condurre esperimenti con concentrazioni di gradiente per trovare la combinazione ottimale di primer e sonde. L'uso delle sonde dipende dallo strumento PCR in tempo reale, Tipo di sonda, e tipo di etichetta fluorescente. Fare riferimento al manuale dello strumento o ai requisiti specifici per ciascuna sonda fluorescente per le regolazioni.
4. Usa aree e pipetti dedicati prima e dopo l'amplificazione, indossare guanti, e cambiarli frequentemente. Dopo l'amplificazione della PCR, Non aprire direttamente i tubi di reazione. Mettili a 4 ° C o -20 ° C per raffreddare sufficientemente prima di aprirsi per ridurre al minimo il rischio di contaminazione del prodotto PCR nell'ambiente sperimentale.