Spesifikasi
Taq DNA Polimerase 1000 U dengan buffer campuran (Pengiriman dengan kantong es)
Penyimpanan Kondisi:
Taq DNA Polimerase dan Taq PCR Kit harus disimpan di -30 hingga -15°C dalam freezer bersuhu konstan setelah diterima.
Tes:
Catatan Sebelum Memulai:
- Dilengkapi dengan Load PCR Buffer yang mengandung reagen pemuatan gel dan pewarna pelacak gel.
- Buffer PCR dan Buffer PCR Beban menghasilkan konsentrasi akhir 1.5 mM MgCl2 dalam campuran reaksi. Sesuaikan konsentrasi Mg2+ jika perlu dengan menambahkan 25 mM MgCl2.
- Campuran dNTP tingkat PCR berkualitas tinggi (10 mm) tersedia secara terpisah jika diperlukan.
- Simpan tabung PCR di atas es sampai dimasukkan ke dalam thermal cycler.
- Sertakan Kontrol Tanpa Templat (NTC) dalam setiap pengujian.
Persiapan dan Pencampuran:
- Lelehkan buffer dan reagen pada suhu kamar atau di atas es, lalu simpan di dalam es setelah pencairan sempurna.
- Siapkan campuran reaksi yang mengandung semua komponen PCR kecuali DNA cetakan. Mempersiapkan 10% volume lebih banyak dari yang dibutuhkan.
- Campur campuran reaksi secara menyeluruh dan tuangkan ke dalam tabung PCR.
- Tambahkan DNA templat (≤1 µg/reaksi) ke tabung PCR. Untuk RT-PCR, tambahkan alikuot dari reaksi transkriptase balik, tidak melebihi 10% dari volume PCR akhir.
Pengaturan reaksi menggunakan SENO Taq DNA Polymerase
| Komponen | Volume/reaksi | Konsentrasi akhir |
| Campuran reaksi | ||
| 10x Buffer PCRˢ¹ atau | 10 μl | 1X |
| 10x Muat Buffer PCR(opsional) | ||
| campuran dNTP (10 mm masing-masing) | 2 μl | 200 µM dari setiap dNTP |
| Contoh 1 | Variabel | 0.1–0,5 µM |
| Primer2 | Variabel | 0.1–0,5 µM |
| Taq DNA Polimerase | 0.5 μl | 2.5 satuan/reaksi |
| Air bebas RNAse | Variabel | |
| Templat DNA (ditambahkan pada langkah 4) | Variabel | ≤1 µg/reaksi |
| Volume reaksi total | 100 μlˢ² |
Panas Bersepeda:
Programkan thermal cycler sesuai dengan instruksi pabrik. Lihat program bersepeda yang disediakan.
Kondisi siklus yang dioptimalkan untuk Taq DNA Polymerase
| Melangkah | Waktu | Suhu | Komentar |
|---|---|---|---|
| Denaturasi awal | 3 menit | 94°C | |
| 3-langkah bersepeda: | |||
| Denaturasi | 0.5–1 menit | 94°C | |
| anil | 0.5–1 menit | 50–68°C | Sekitar 5°C di bawah Tm primer. |
| Perpanjangan | 1 menit | 72°C | Untuk produk PCR lebih lama dari 1 kb, gunakan waktu perpanjangan kira-kira 1 menit per kb DNA. |
| Jumlah siklus | 25–35 | ||
| Perpanjangan terakhir | 10 menit | 72°C |
Sederhana Mulai Panas:
Mulai program PCR. Setelah thermal cycler mencapai 94°C, tempatkan tabung PCR di dalam cycler untuk meningkatkan spesifisitas.
Pasca PCR:
- Setelah amplifikasi, sampel dapat disimpan pada suhu 2–8°C semalaman atau pada suhu -20°C untuk penyimpanan lebih lama.
- Produk PCR dapat langsung dimasukkan ke dalam gel agarosa menggunakan Load PCR Buffer tanpa terlebih dahulu menambahkan buffer pemuatan dan pewarna pelacak gel. Lihat tabel yang tersedia untuk mengetahui jarak migrasi dan pewarna pelacak gel.
Jarak migrasi pewarna pelacak gel di Load PCR Buffer
| % TAE (TBE) Agarose gel | pewarna merah | Pewarna oranye |
| 0.8 | 500 (270) bp | ~80 (<10) bp |
| 1.0 | 300 (220) bp | ~40 (<10) bp |
| 1.5 | 250 (120) bp | ~20 (<10) bp |
| 2.0 | 100 (110) bp | <10 (<10) bp |
| 3.0 | 50 (100) bp | <10 (<10) bp |
Ulasan
Belum ada ulasan.