Solarbio Kreatin Kinase (CK) Kit Uji Aktivitas

Kreatin Kinase (CK) Kit Uji Aktivitas

Catatan: Ambil dua atau tiga sampel berbeda untuk prediksi sebelum pengujian.

Peralatan Operasi: Spektrofotometer

Kucing No: BC1140

Ukuran:50T/48S

Komponen:

Ekstrak larutan: 60 Ml × 1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

Reagen I: bubuk × 1, disimpan dalam gelap di -20 ℃. Dissolved in 10 mL air suling sebelum digunakan, Reagen yang tidak digunakan harus disimpan di -20 ℃ setelah pengemasan ulang, pembekuan dan pencairan berulang dilarang.

Reagen II: bubuk × 1, disimpan di -20 ℃. Dissolved in 0.5 mL air suling sebelum digunakan, Reagen yang tidak digunakan harus disimpan di -20 ℃ setelah pengemasan ulang, pembekuan dan pencairan berulang dilarang.

Reagen III: bubuk × 2, disimpan di -20 ℃. Dissolved in 0.5 mL air suling sebelum digunakan, Reagen yang tidak dapat digunakan harus disimpan pada -20 ℃ setelah pengemasan ulang, pembekuan dan pencairan berulang dilarang.

Reagen IV: bubuk × 1, disimpan di -20 ℃. Dissolved in 0.65 mL air suling sebelum digunakan, Reagen yang tidak digunakan harus disimpan di -20 ℃ setelah pengemasan ulang, pembekuan dan pencairan berulang dilarang.

Reagen V: 15 Ml × 1. Penyimpanan pada suhu 4℃.

 

Deskripsi Produk:

Creatine kinase (CK) (EC 2.7.3.2) juga dikenal sebagai creatine phosphokinase, yang terutama ada di hati, otot, dan otak. Itu dapat secara reversibel mengkatalisasi reaksi trans-fosfor antara creatine dan ATP. Ini adalah kinase penting yang berhubungan langsung dengan transportasi energi sel, Kontraksi otot dan regenerasi ATP.

CK mengkatalisasi kreatin fosfat dan ADP untuk menghasilkan creatine dan ATP, Hexokinase mengkatalisasi ATP dan glukosa untuk menghasilkan glukosa-6-fosfat, dan dehidrogenase glukosa-6-fosfat mengkatalisasi glukosa-6- Fosfat dan NADP+ untuk menghasilkan NADPH, mengakibatkan peningkatan 340 NM Nilai Penyerapan Cahaya, yang digunakan untuk mengekspresikan aktivitas enzim CK.

Reagen dan Peralatan Diperlukan tetapi Tidak Disediakan

Timbangan, sentrifuge suhu rendah, Bawah Air Suhu Konstan, spektrofotometer, 1 Cuvette kuarsa ml dan air suling.

Prosedur

SAYA. Ekstraksi larutan enzim mentah:

1. 1. Sampel jaringan:

Proporsi massa jaringan (G): volume solusi ekstrak (ml): 1:5~10 (disarankan untuk menimbang 0.1 g tisu, menambahkan 1 ML larutan ekstrak) untuk homogenitas pemandian es. Sentrifugasi di 10000 ×g untuk 15 menit pada 4 ℃, Ambil supernatan dan letakkan di atas es untuk pengujian.

2. Sampel serum:

Penentuan langsung.

3. Sampel sel:

Jumlah sel (104): volume solusi ekstrak(ml) adalah 500 ~ 1000:1 (1 ML larutan ekstrak disarankan untuk ditambahkan ke 5 juta sel), Solusi ekstrak ditambahkan, dan sel -selnya rusak oleh gelombang ultrasonik dalam penangas es (Kekuatan: 300W, ultrasonik: 3S, selang: 7S, waktu keseluruhan: 3 menit). Sentrifugasi di, 10000×g untuk 10 menit pada 4 ℃, supernatan dan menempatkannya di atas es untuk pengujian.

II. Tes prosedur:

1. Panaskan lebih dulu spektrofotometer lebih dari 30 menit, sesuaikan panjang gelombangnya 340 nm, dan sesuaikan dengan nol dengan air suling.
2. Solusi kerja: Campurkan reagen i, Reagen II, Reagen III, Reagen IV dan reagen v dalam proporsi 70:4:7:10:90 (rasio volume) sebelum digunakan. Persiapkan saat solusinya akan digunakan. Diinkubasi untuk 20 menit dalam suhu kamar sebelum digunakan (Langkah ini tidak dapat dihilangkan).
3. Meja operasi: Tambahkan reagen berikut ke dalam 1 ML Cuvette

Nama Reagen (μL)	Tabung Kosong (AB)	Tabung reaksi (PADA)
larutan enzim kasar	–	200
Solusi kerja	450	450
Air sulingan	550	350
Tambahkan reagen di atas ke dalam 1 ML kuarsa cuvette masing -masing, Campur dengan baik dan ukur nilai absorbansi A1 di 340 nm untuk 10 S, Tempatkan mereka dengan cepat di kamar mandi 37 ℃ 3 menit (Pembaca mikro yang dikontrol suhu dapat diatur ke 37 ℃), Keluarkan nilai absorbansi A2 di 190 s dan hitung Δat = a2t- A1T, ΔAB = A2B- A1B, ΔA = ΔAT-ΔAB. Tabung kosong hanya perlu dilakukan 1–2 kali.

AKU AKU AKU. Perhitungan CK:

• Dihitung dengan konsentrasi protein jaringan:

Definisi aktivitas enzim: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi produksi 1 nmolof nadph per menit pada 37 ℃ dan ph7.0 setiap miligram protein.

Aktivitas CK (U/mg keuntungan) = Δa ÷(×d)× VRT × 109 ÷ (Vs × CPR) ÷ t = 268 × ΔA ÷ CPR

• Dihitung dengan kualitas sampel jaringan:

Definisi aktivitas enzim: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi produksi 1 nmol nadph per menit pada 37 ℃ dan ph7.0 di setiap gram sampel.

Aktivitas CK (U/g berat segar) = Δa ÷(×d)× VRT × 109 ÷ (Vs ÷ vst × w) ÷ t = 268 × ΔA ÷ w

• Dihitung dengan volume serum:

Definisi aktivitas enzim: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi produksi 1 nmol nadph per menit pada 37 ℃ dan ph7.0 di setiap mililiter serum.

Aktivitas CK (U/mL) = Δa ÷(×d)× VRV × 109 ÷ vs ÷ t = 268 × ΔA

• Dengan jumlah sel:

Definisi aktivitas enzim: Satu unit aktivitas enzim didefinisikan sebagai jumlah enzim mengkatalisasi produksi 1 nmol of nadph per menit pada 37 ℃ dan ph7.0 setiap 10000 sel.

Aktivitas CK (U/104sel)= Δa ÷(×d)× VRV × 109 ÷(Vs ÷ vst × n)÷ t = 268 × ΔA ÷ n

 

e: Koefisien kepunahan molar NADPH, 6.22× 103 l/mol/cm; D: Diameter cahaya cuvette, 1 cm;

Vrt: Volume total sistem reaksi, 0.001 ml;

Vs.: Volume sampel dalam sistem reaksi, 0.2 ml; Vst: Volume solusi ekstrak, 1 ml;

Cpr: Konsentrasi protein sampel, mg/mL; W: Massa massa sampel, G;

N: Jumlah sel, 104 unit; T: waktu reaksi, 3 menit.

Catatan:

1. CK serum tidak stabil. Sampel dikumpulkan dan diukur sesegera mungkin. CK serum stabil untuk 24 beberapa jam setelah disimpan di 4 ℃ dalam gelap.
2. Kandungan protein sampel perlu ditentukan secara terpisah. protein BCA Kit Penentuan Konten dapat digunakan untuk penentuan.
3. Jika nilai OD lebih besar dari 0.6, Sampel dapat diencerkan dengan benar dengan larutan ekstrak, dan formula perhitungan dapat diubah sesuai rasio pengenceran.
4. Δab umumnya tidak melebihi 01.

Contoh eksperimental：

1. Ambil 0,1g otak tikus, tambahkan 1mL larutan ekstrak, homogenat dan menggiling. Ambil supernatannya, Kemudian encerkan dengan ekstrak 4 kali dan deteksi sesuai dengan langkah yang diukur. Hitung ΔAT = A2T- A1T = 0,638-0.149 = 0,489, ΔAB = A2B-A1B = 0， ΔA = ΔAT-ΔAB = 0,489-0 = 0,489, menghitung aktivitas enzim berdasarkan berat sampel:

Aktivitas CK （u/g berat） = 268 × ΔA ÷ W × 4 （Rasio pengenceran） = 268 × 0,489 ÷ 0,1 × 4 （Rasio pengenceran）

= 5242.08U/g Berat.

2. Ambil 200μl serum bebek untuk mendeteksi secara langsung, Hitung ΔAT = A2T-A1T = 0,445-0.423 = 0,022, ΔAB = A2B- A1B = 0, ΔA = ΔAT-ΔAB = 0,022-0 = 0,022, Hitung aktivitas enzim sesuai dengan volume serum:

Aktivitas CK （u/ml） = 268 × ΔA = 268 × 0,022 = 5.896 U/mL.

Referensi：

• Defang li, Di lu, Jichunhan, et al.eriodictyol melemahkan cedera iskemia-iskemia miokard melalui aktivasi JAK2. Perbatasan dalam imunologi. Januari2018;(IF3.845)
• Xu y, Meng x, Hou x, dkk. Mutan dari peptida antitumor-analgesik ButhusmartensiKarsch menunjukkan hambatan ke HNAV1. 4 dan hnav1. 5 saluran sambil mempertahankan aktivitas analgesik[J].Jurnal Kimia Biologis, 2017, 292(44):18270-18280

Produk-produk terkait：

BC2030/ BC2035 Isocitrate Lyase (Icl) Kit Uji Aktivitas

BC3170/ BC3175 Asetate Kinase (ACK) Kit Assay Activity

BC3120/ BC3125 Plant Dehydrogenase(PDHI) Kit Uji Aktivitas

BC4220/ BC4225 4-Koumaric Asam Coenzyme A Ligase (4Cl) Kit Uji Aktivitas

BC4220/ BC4225 4-Koumaric Asam Coenzyme A Ligase (4Cl) Kit Uji Aktivitas