Kit za otkrivanje nukleinske kiseline salmonele

Stavka br：AP2308004 Specifikacija：24T/48T Skladištenje：-20℃

Predstavljanje proizvoda：

Salmonella is a common foodborne pathogenic bacterium that can lead to salmonellosis, with eggs, poultry, and meat being common sources of transmission. This test kit utilizes real-time fluorescent quantitative PCR technology to selectively amplify specific DNA segments of Salmonella in samples such as water, feces, and suspected contaminated food. The presence of Salmonella in the sample can be determined by the Ct value, or the contamination level of Salmonella in the sample can be determined through a standard curve.

Sadržaj proizvoda：

Uvjeti skladištenja：

Čuvati na -20℃, rok trajanja je najmanje 12 mjeseca.

Eksperimentalni rad：

1. Priprema uzorka (Prostor za pripremu uzorka)

1.1 Zahtjevi za uzorke:

– Oralni i kloakalni brisevi: Uzmite sterilnu vatu, umetnite ga u grlo ptice ili kloaku, okrenite tri puta, stavite u epruvetu za centrifugu, odrežite izloženi dio, čvrsto zatvorite čep, i označite ga. Uzorke koji se mogu odmah testirati treba pohraniti na 2-8°C unutar 24 sati, a uzorke koji se ne mogu odmah testirati treba pohraniti na -20°C.

– Puna krv: Koristite EDTA kao antikoagulans, izbjegavati heparin antikoagulans, koristite svježu punu krv, ili čuvati na 2-8°C ne dulje od 7 dana, ili čuvati na -20°C ne dulje od 3 mjeseca, izbjegavanje ponovljenih ciklusa smrzavanja i odmrzavanja.

– Tkivo: Uzmite svježe mišićno ili organsko tkivo koje ne prelazi 100 mg, koristite 200-500 μL sterilne vode za pripremu homogenata tkiva, i nastaviti s naknadnom pripremom uzorka.

1.2 Priprema uzorka:

According to the “GB 4789.4-2016 National Food Safety Standard – Food Microbiological Examination – Salmonella Test” section 5.1 or other applicable standards, process the sample by pre-enrichment, and prepare the bacterial suspension for later use. Weigh 25g (ml) of the sample and place it in a sterile homogenization cup containing 225mL of Buffered Peptone Water (BPW). Homogenize at 8000rpm/min to 10000rpm/min for 1min to 2min or place it in a sterile homogenization bag containing 225mL of BPW and homogenize with a stomacher for 1min to 2min. If the sample is liquid, homogenization is not necessary; shake it well. If pH measurement is required, adjust the pH to 6.8±0.2 using 1mol/mL sterile NaOH or HCl.Perform aseptic operations to transfer the sample to a 500mL conical flask. If using a homogenization bag, direct cultivation can be performed. Incubate at 36°C±1°C for 8h to 18h. If the sample is a frozen product, thaw at temperatures below 45°C for no more than 15min or at 2°C to 5°C for no more than 18h.Refer to the Sanshi Biological “Total DNA/RNA Extraction Kit Priručnik” (Katalog: DP201) or other nucleic acid extraction kits/methods that meet relevant requirements for nucleic acid extraction from processed samples. Place the extracted nucleic acid samples in an icebox and perform the detection as soon as possible. Čuvati na 4°C ne duže od 7 dana ili na -20°C ne više od 6 mjeseca.

2. Priprema sustava za reakciju (Područje reakcije)

2.1 Izvadite svaku komponentu kompleta, potpuno otopiti na sobnoj temperaturi, centrifuga za 10 sekundi, i centrifugirajte tekućinu unutar stijenke epruvete i poklopca epruvete do dna epruvete. Pripremite reakcijsku otopinu prema količini uzorka (n+2, gdje je n broj uzoraka, preporuča se postaviti 1 pozitivna kontrola i 1 negativna kontrola za svaki eksperiment). Specifična metoda pripreme: uzeti (n+2) reaction tubes containing Sal premix solution, dodajte 11,5 µL PiHV reakcijske otopine u svaku epruvetu, upotrijebite pipetu za temeljito miješanje, 23µL po jažici, i čuvati u hladnjaku.

2.2 Zatim uzastopno dodajte 2 μL negativne kontrole, ekstrahirani uzorak nukleinske kiseline, and Sal positive control to the reaction solution. Zatvorite čep tube, napraviti zapisnik, a ukupni volumen svake reakcije je 25μL. Temeljito promiješajte, centrifuga za 10 sekundi, te izvoditi pokuse amplifikacije na PCR instrumentu.

3. PCR amplifikacija (Područje pojačanja i analize proizvoda)

Preddenaturacija na 95°C za 2 minuta; Denaturacija na 95°C za 10 sekundi, žarenja i istezanja na 60°C za 35 sekundi, 40 ciklusi. Prikupite fluorescentne signale na 60°C. Odaberite FAM fluorescentni kanal (koristiti kvantitativne PCR instrumente fluorescencije u stvarnom vremenu kao što je serija ABI, ako je potrebno, obratite se proizvođaču ili dodajte ROX korekcijsku boju; inače, slijedite normalne postupke).

4. Tumačenje rezultata

4.1 Uvjeti za valjanost eksperimenta:

Positive control: Ct value in the FAM channel < 28 and the appearance of an “S”-oblikovana krivulja pojačanja. Negativna kontrola: Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 40 i br “S”-oblikovana krivulja pojačanja. The experiment results are valid under these conditions; inače, ponovite eksperiment. If repeated testing is still invalid, Molimo kontaktirajte tehničko osoblje proizvođača.

4.2 Tumačenje rezultata uzorka:

Ct vrijednost ≤ 35 with an “S”-shaped amplification curve is considered positive for Salmonella nucleic acid. Ct vrijednost između 35 i 40 smatra se sumnjivim, and retesting is recommended. This may be due to substandard nucleic acid extraction or the presence of strong inhibitory substances (such as residual disinfectants, antikoagulansi, itd.). It is suggested to reprocess the sample for nucleic acid extraction and amplification. First, exclude “lažno pozitivan” results caused by aerosol contamination, then re-extract and test the nucleic acid. Ako, after excluding aerosol contamination, the FAM channel retest shows a Ct value < 35 with a clear amplification curve, it is considered positive; inače, it is considered negative.

Nema Ct vrijednosti ili Ct vrijednost ≥ 40 i br “S”-shaped amplification curve is considered negative for Salmonella nucleic acid.

Mjere predostrožnosti：

• Za sprječavanje kontaminacije, eksperiment treba biti strogo podijeljen, a poželjna je fizička izolacija između pregrada kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija uzrokovana ljudskim čimbenicima. Tijekom eksperimenta nosite laboratorijske kute i rukavice od lateksa, samostalno koristiti alate u različitim područjima, promijenite rukavice i laboratorijske kute kada je to potrebno. Nakon PCR-a, nemojte odmah otvarati poklopac; otvorite ga nakon dovoljnog hlađenja kako biste smanjili kontaminaciju aerosolom.
• Prije upotrebe potpuno otopite reagense, ali izbjegavajte ponavljane cikluse smrzavanja i odmrzavanja. PCR reakcijske epruvete koje se nalaze u kompletu su od 0,2 ml; ako je potrebna zamjena, prijenos nakon potpunog odmrzavanja. Strogo slijedite upute za pripremu reagensa i dodavanje uzorka. Radne stanice, centrifuge, pipete, a ostale instrumente treba redovito dezinficirati dezinficijensima koji sadrže klor, alkohol, sredstva za dekontaminaciju nukleinske kiseline, ili UV svjetlo.
• Negativan rezultat ne znači nužno da domaćin nije zaražen virusom. Loša kvaliteta uzorka, nisko opterećenje virusima, ili prisutnost jakih inhibitornih tvari (kao što su alkohol, dezinfekcijska sredstva, antikoagulansi, itd.) može rezultirati neuspješnom ekstrakcijom nukleinske kiseline (otkrivanje) i a “negativan” proizlaziti. Slijedite kriterije tumačenja rezultata, a kada postoje sumnjivi rezultati, prvo isključite kontaminaciju aerosolom. Ako ima još pitanja, obratite se tehničkom osoblju proizvođača.
• Ovaj proizvod je samo za jednokratnu upotrebu. Komponente u reagensu osjetljive su na prirodno svjetlo; izbjegavajte izlaganje svjetlosti tijekom pakiranja i skladištenja. Nakon pakiranja, nemojte opetovano zamrzavati-otapati. Samo za znanstvena istraživanja; ne za kliničku dijagnozu ili druge svrhe.