SENO Sperm Sample DNA Extraction Kit

1. Composants du kit de réactifs

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

The sperm sample genomic DNA extraction kit provides a rapid and efficient purification solution for sperm sample DNA. It achieves sample Purification de l'ADN effectively through a dedicated extraction buffer system combined with specific nucleic acid purification columns.

This kit can extract sperm sample DNA within 30 minutes, et l'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN.Reagent Buffer SP:This buffer should be stored long-term in an environment between 2℃ and 8℃

B.Tampon réactif C peut précipiter dans des conditions de basse température. It is recommended to heat at 65℃ for 5 minutes. Après dissolution du précipité, il peut être utilisé normalement.

C.Tampon de lavage 1: Avant utilisation, add the specified amount of anhydrous ethanol as indicated on the reagent bottle label. Cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol anhydre..

D. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE containing a minimal amount of EDTA. Si l'EDTA a un impact sur les expériences ultérieures, il est recommandé d'utiliser de l'eau déminéralisée stérile comme substitut au tampon d'élution.

1. Traitement des échantillons:

Pipette 200µl of frozen sperm, incubate at 75℃ for 10 minutes until the sperm sample is not viscous. Centrifuger à 12000 tr/min pour 5 minutes, aspirer le surnageant autant que possible, and the sperm cells will sediment at the bottom of the tube.

2. Add to the sediment from the previous step: 400μl Reagent Buffer SP, 20µl de protéinase K (10 mg/ml), 20µl RNaseA (10 mg/ml).Digest at 65℃ for 10 minutes, inverser et mélanger 6-7 times during digestion until the sample is fully digested.
3. Ajoutez un volume égal de Tampon réactif C and an equal volume of anhydrous ethanol, and mix well by pipetting.

(Par exemple: If you add 400μl of Reagent Buffer IV, you will need to add approximately 460μl of Reagent Buffer C and 460μl of anhydrous ethanol. A small amount of precipitation may form after adding Reagent Buffer C, Mais cela n'affecte pas les expériences ultérieures.)

4. Transfer the obtained liquid to a DNA extraction purification column (cassette) (environ 650-700μl à chaque fois). Let it stand at room temperature for 2 minutes, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides collectés, et réinsérez le tube de collecte dans la colonne de purification pour l'étape suivante.
5. Répétez l'étape 4, Ajout du liquide restant à la colonne de purification d'extraction d'ADN (cassette), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, discard the waste liquid and the collection tube.
6. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (cassette) dans le tube de collection, ajouter 300 µl de tampon de lavage 1, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 minute, jeter les déchets liquides, and place the DNA extraction purification column (cassette) back into the tube for the next step.

(Note: Confirm that anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Ajouter 500µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'extraction d'ADN (cassette), centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 minutes, extend the centrifugation time appropriately to dry the membrane more thoroughly.
8. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (cassette) dans un nouveau tube à centrifuger, ouvrir le couvercle, incubate at 65℃for 2 minutes. Extend this step if necessary to evaporate ethanol as much as possible, preventing ethanol residue from affecting downstream experiments.
9. Drop-suspend 50-100µl de tampon d'élution sur la membrane, centrifuger à 12,000 tr/min pour 2 minutes.

(Note: 1. Using 50μl of Elution Buffer to elute DNA can increase DNA concentration but decreases the overall DNA yield. 2. L'ADN élué peut être réappliqué à la colonne de purification d'extraction d'ADN, centrifuged at 12,000 tr/min pour 2 minutes again, to increase DNA yield.)