Capacité antioxydante totale de Solarbio (T-AOC) Kit d'analyse

Capacité antioxydante totale (T-AOC) Kit d'analyse

Note: Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test.

Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre

Chat non: BC1310

Taille：50T/48S

Composants:

Extraire la solution: Liquide 50 mL×1. Stockage à 4℃, precool avant utilisation.

Réactif I: Liquide 35 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif II: Liquide 20 mL×1. Stockage à 4 ℃ dans l'ombre.

Réactif III: Liquide 5 mL×1. Stockage à 4 ℃ dans l'ombre.

Standard: Poudre × 1, 10 Mg de feso4 · 7h2o. Solution de travail: ajouter 0.9 ml d'eau distillée et 20 μl d'acide sulfurique concentré (H2SO4) aux formes 40 µmol / ml de solution standard FESO4. Mélange de solution (Préparer quand la solution sera utilisée): Réactif I : Réactif II: Réactif iii = 7:1:1, incuber à 37 ℃ avant utilisation.

Description du produit:

Ce kit est utilisé pour détecter le total des niveaux antioxydants d'antioxydants et d'enzymes antioxydants dans les échantillons. Il est principalement utilisé dans l'étude de biologique, Études médicales et pharmaceutiques pour détecter la capacité antioxydante totale des solutions antioxydantes.

Dans un environnement acide, Fe3 + -tptz sont réduits en bleu Fe2 + -Tptz. La réaction couleur reflète la capacité antioxydante totale.

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre, bain d'eau à température constante, centrifugeuse basse température, 1 Cuvette en verre ML et eau distillée.

Procédure:

je. La préparation des échantillons:

1. Sérum, plasma, salive, ou échantillons d'urine

Plasma (anticoagulation avec de l'héparine ou du citrate de sodium, Évitez d'utiliser EDTA), centrifuger à 5000 RPM / min pour 10 min, prendre le surnageant pour tester. Prendre le sérum, échantillons de salive ou d'urine pour déterminer directement. Aussi, Vous pouvez stocker à -80 ℃ et détecter à l'intérieur 30 jours.

2. Cellules ou tissus échantillon

Prendre 1-2 millions de cellules ou 0.1 g de tissu, ajouter 1.0 mL de solution d'extrait. Utilisez l'homogénat ou l'échographie pour briser complètement les cellules et libérer des antioxydants, centrifuger à 10000 r / min et 4 ℃ pour 5 min, prendre le surnageant pour tester. Mesurez la concentration de protéines si nécessaire.

II. Procédure de détermination:

1. Diluer 40 μmol / ml de solution standard FESO4 à 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 µmol/mL, prendre 500 µL de solution étalon (Eau distillée pour le contrôle vide), Ajouter à 500 µL de réactif II. Mélanger soigneusement pour 10 min, détecter l'absorbance dans 593 nm, Calculer ΔA = As-AB. (COMME: Tube de solution standard, UN B: tube de commande vide.) La concentration finale de Fe2 + est 0.05、0.025、0.0125、0.00625、

0.003125、0.00156 µmol/mL.

2. Préchauffer le spectrophotomètre 30 min, ajuster la longueur d'onde à 593 nm et mettre à zéro avec distillé
3. Ajoutez des réactifs avec la liste suivante:

Nom du réactif	Tube vierge (UN B)	Tube à essai (À)
Mélange de solution (µL)	900	900
Échantillon (µL)		30
Double eau distillée (µL)	120	90
Mélanger soigneusement et réagir pour 10 min, mettre à zéro avec de l'eau distillée, détecter l'absorbance dans 593 nm. Calculer Δa ’= à – UN B. (Note: Le tube vide doit être testé une ou deux fois dans chaque expérience)

III. Calcul:

1. Créer une courbe standard

Prenez la concentration finale Fe2 + comme l'axe X, △ A As Axe Y, Créer une courbe standard, obtenir l'équation de régression linéaire y = kx + b, prendre Δa’ dans l'équation pour obtenir x (µmol/mL).

2. Définition de l'unité: La capacité antioxydante de l'échantillon est indiquée par la concentration standard d'ions liquides requise pour le même changement d'absorbance(ΔA).

UN. Protéine concentration:

Capacité antioxydante totale (μmol / mg prot) = x × vrv ÷ (Vs × cpr) = 34 × x ÷ CPR

B. Échantillon poids

Capacité antioxydante totale (μmol / g poids) = x × vrv ÷ (Vs ÷ vsv × w) = 34 × x ÷ W

C. Cellule montant

Capacité antioxydante totale (μmol / 104cell) = x × vrv ÷ (Vs × vsv ÷ n) = 34 × x ÷ n

D. Solution volume

Capacité antioxydante totale (µmol/mL) = x × vrv ÷ vs = 34 × x

Corde: Volume de réaction total, 1.02 ml; Contre: volume de l'échantillon, 0.03 ml;

Vsv: volume d'extraction, 1 ml; W: poids d'échantillonnage, g;

Cpr: concentration en protéines de l'échantillon, mg/ml;

n: quantité de cellule, unité basée sur 104 (dix mille).

Note:

1. Le réactif II est irrité au corps humain, Veuillez porter des vêtements de laboratoire et le latex
2. Les échantillons ne doivent pas être apparus en bleu dans un état acide, ou il en interférera le résultat du résultat du
3. Détergent tel que Tween, Triton, NP-40 et réductants tels que DTT, L'éthanol Mercapto ne doit pas être ajouté dans le
4. Si la valeur d'absorbance déterminée par l'échantillon est au-delà de la plage de courbe standard, L'échantillon doit être dilué ou concentré correctement avant
5. Le kit doit être stocké AT2-8 ℃.

Exemples:

1. Ajouter un trèfle de 0,1 g à une solution d'extrait de 1 ml et broyer soigneusement sur la glace, prendre un surnageant, Suivez la procédure de détermination pour fonctionner, avec des plaques à fond plat à 96 puits pour calculer: ΔA = A(T)-UN(B)= 0,909-0.148 = 0,761, courbe standard: y = 21,056x-0.0087, calculer x = 0,037, Selon la masse d'échantillon pour calculer la capacité antioxydante totale (μmol / g masse) = 34 × x ÷ W = 34 × 0,037 ÷ 0,1 = 12,85 μmol / g masse.

Les références：

[1] Pellegrini n, Serafini M, Salvatore S, et autres. Capacité antioxydante totale des épices, fruits secs, noix,

impulsions, céréales, et les bonbons consommés en Italie évalués par trois tests in vitro différents[J.]. Nutrition moléculaire & recherche alimentaire, 2006, 50(11): 1030-1038.

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