Kit d'analyse de la teneur en amidon Solarbio

Kit d'analyse de la teneur en amidon

Note: Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test. Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre/lecteur de microplaques.

Chat non: BC0705

Taille: 100T/96S

Composants:

Réactif I: 110 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif II: 110 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif III: Poudre × 2. Stockage à 4℃.

Standard: Poudre × 1, 10 mg de glucose (anhydre). Stockage à 4℃.

Solution standard: Dissous avec 1 mL d'eau distillée pour 10 mg/mL de solution étalon de glucose lorsque la solution étalon sera utilisée. Il peut être stocké pendant 2 semaines à 4℃.

Solution de travail: Ajouter 2.625 mL d'eau distillée pour le réactif III, ajouter lentement 14.875 mL de H2SO4 concentré, remuer constamment et dissoudre complètement avant utilisation. Il peut être stocké pendant 1 semaine à 4℃.

Description du produit:

L'amidon est la principale forme de stockage du sucre dans les plantes. La détermination de la teneur en amidon revêt une grande importance dans l'évaluation de la valeur nutritionnelle des aliments et dans la recherche sur le métabolisme des sucres dans les plantes..

Séparez le sucre soluble de l'amidon en 80% éthanol, puis décomposer l'amidon en glucose par hydrolyse acide. La teneur en amidon peut être calculée en mesurant la teneur en glucose à l'aide d'une méthode colorimétrique à l'anthrone..

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre/lecteur de microplaques, bain d'eau, pipette réglable, cuvette en verre micro/plaque à fond plat de 96 puits, mortier/homogénéisateur, glace, H2SO4 concentré et eau distillée.

Procédure:

je. La préparation des échantillons:

1. 1. Prendre 5 mg d'échantillon, broyer au mortier et ajouter 1 mL de réactif I. Après homogénéisation, transférer dans un tube à centrifuger, placer dans un bain-marie à 80℃ pendant 30 minutes, puis centrifuger à température ambiante et 3000 ×g pour 5 minutes, jeter le surnageant, retenir les précipitations.
   2. Ajouter 0.5 mL d'eau distillée au précipité. Placer au bain-marie bouillant pendant 15 minutes (serrez le couvercle pour éviter la perte d'eau)
   3. Après refroidissement, ajouter 1 mL de réactif II, mettre au bain-marie bouillant pendant 15 min, secouer 3 à 5 fois
   4. Après refroidissement, centrifuger à température ambiante et 3000 ×g pour 15 minutes, prendre le surnageant pour le test.

II. Détermination procédure:

1. Préchauffer le spectrophotomètre/lecteur de microplaques pendant 30 minutes, ajuster la longueur d'onde à 620 nm, mettre à zéro avec de l'eau distillée.
2. Régler le bain-marie à 95°C.
3. Solution de travail standard: diluer le 10 mg/mL de solution étalon avec de l’eau distillée pour 0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/ml.
4. Essai standard: Prendre 50 μL de solution étalon ou 50 µL d'eau distillée (Tube vierge) et 250 µL de solution de travail dans un tube EP. Placer dans un bain-marie à 95 ℃ pendant 10 minutes (serrez le couvercle pour éviter la perte d'eau), refroidissement naturel à température ambiante, prendre 200 μL dans une cuvette en verre micro/plaque à fond plat de 96 puits, déterminer l'absorbance de la solution étalon(COMME) et contrôle vide(UN B) à 620 nm. Calculer ΔA=AS — AB. Le tube vierge et la courbe standard ne doivent être testés qu'une ou deux fois.
5. Échantillon test: Prendre 50 µL d'échantillon et 250 μL de solution de travail en EP Placer dans un bain-marie à 95 ℃ pendant 10 minutes (serrez le couvercle pour éviter la perte d'eau), naturellement refroidi à température ambiante, prendre 200 μL dans une cuvette en verre micro/plaque à fond plat de 96 puits, déterminer l'absorbance du tube à essai(À) à 620 nm. Calculer ΔAˊ= AT — AB.

III. Calculs:

1. Créer une courbe standard

Prendre une solution étalon de glucose (0.4, 0.2, 0.1, 0.05, 0.04, 0.03, 0.02, 0.01 mg/ml) comme axe x, ΔA comme axe y, pour tracer la courbe standard et obtenir l'équation de régression linéaire y=kx+b, la substitution de ΔAˊ dans l'équation donne x(mg/ml).

2. Calcul de la teneur en amidon Calculé par la masse de l'échantillon Teneur en amidon (mg/g masse) = x×F×VE÷W÷1,11=1,351x÷W×F VE: volume après extraction, 1.5 ml;

W: masse de l'échantillon, g;

F: taux de dilution;

1.11: est la constante de conversion de la teneur en glucose mesurée par cette méthode en teneur en amidon, c'est, 111

μg de glucose est coloré par le réactif anthrone, ce qui équivaut à 100 μg d'amidon par réactif anthrone.

Note:

1. Comme le fluide de travail est très corrosif, veuillez opérer avec
2. Si la valeur d'absorbance dépasse la plage linéaire, la taille de l'échantillon peut être augmentée ou diluée avant la détermination.

Exemple expérimental:

1. Prendre 0,05 g de maïs pour le traitement des échantillons, prends le surnageant, puis opérer selon les étapes de détermination. Utiliser 96 plaque à puits pour mesurer et calculer ΔA′=AT-AB= 0.728-0.622 =0,195, courbe standard y = 3,1829x + 0.002, calculer x = 195. Teneur en amidon (mg/g masse) = 1,351x×F÷W= 1,351×0,195 × 128÷0,05 = 674.4 mg/g masse.

Les références

• Clegg KM. L'application du réactif anthrone à l'estimation de l'amidon dans les céréales[J.]. Journal de la science de l'alimentation et de l'agriculture, 1956, 7(1):40-44.
• Viles Jr F J, Silverman L.. Détermination de l'amidon et de la cellulose avec de l'anthrone [J.]. Chimie analytique, 1949, 21(8):950-953.

Produits connexes

BC0610/BC0615 β-glucosidase du sol (b- CG) Kit de test d'activité

Kit de test d'activité β-amylase BC2040/BC2045

Synthase d'amidon soluble BC1850/BC1855(SSS) Kit de test d'activité