Peroxydase (COSSE) Kit de test d'activité

Note: Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test.

Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre Numéro de catalogue: BC0090 Tailles：50T/48S

Composants:

Extraire la solution: 60 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif I: 40 mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif II: 0.5 ml × 1. Stockage à 4℃. Centrifuger avant utilisation. Prendre 0.22 ml de réactif II et ajouter 3.33 ml de réactif i, Mélangez-le pour une utilisation ultérieure (environ 27T). Préparez-le pour une utilisation immédiate, ou il peut être préparé en proportion en fonction du volume de l'échantillon.

Réactif III: 10 mL×1. Stockage à 4℃.

Description du produit

Peroxydase (COSSE, CE 1.11.1.7) existe largement chez les animaux, plantes, et micro-organismes. Il peut catalyser l'oxydation des phénols et des amines par du peroxyde d'hydrogène, et a le double effet de l'élimination de la toxicité du peroxyde d'hydrogène, phénols, et amines. En présence de peroxyde d'hydrogène, POD peut catalyser le H2O2 oxyder des substrats spécifiques pour produire une substance qui a une absorption à 470 nm.

Réactifs et équipements requis mais non fournis

Spectrophotomètre, centrifugeuse de bureau, agent de transfert, 1 Cuvette en verre ml, mortier/homogénéisateur, glace et eau distillée.

Procédure

je. La préparation des échantillons:

UN. Bactéries ou cellules

Collecte de bactéries ou de cellules dans le tube à centrifuger, Le surnageant est jeté après centrifugation. Il est suggéré de prendre 5 millions de bactéries/cellule et ajoutez 1 mL de solution d'extrait. Les bactéries ou la cellule sont divisées par ultrasonication (Pouvoir: 20% ou 200 W, temps de travail 3s, intervalle 10s, répéter pour 30 fois). Centrifuger à 8000 tr/min et 4℃ pour 10 minutes, Le surnageant est utilisé pour le test.

B. Tissu

Il est recommandé de prendre environ 0.1 g de mouchoir et ajouter 1 mL de solution d'extrait, broyer complètement sur la glace.

Centrifuger à 8000 tr/min pour 10 minutes à 4℃, Le surnageant est utilisé pour le test.

C. Sérum (plasma) échantillon: Détecter l'échantillon

II. Détermination procédure

1. Spectrophotomètre de préchauffage pour 30 minutes, ajuster la longueur d'onde à 470 nm, mettre à zéro avec distillé
2. Place réactif je, Réactif II et réactif III à 37 ℃ (mammifère) ou 25 ℃(autres espèces) pour 10 Quelques minutes avant
3. Ajoutez des réactifs avec la liste suivante:

Les réactifs ci-dessus sont ajoutés à 1 Cuvette en verre ML en séquence, Immédiatement mélangé et chronométré. Les valeurs d'absorbance a1 pour 30 S et A2 pour les années 90 à 470 NM est enregistré, ΔA ＝ A2-A1.

III. Calculs

je. Sérum (plasma)échantillon

Définition de l'unité: Une unité d'activité enzymatique est définie comme la quantité d'enzyme catalyse l'absorbance de 0.01 changer 470 nm dans le système de réaction par minute tous les millilitres de sérum (plasma).

COSSE(U/mL)= ΔA × VRV ÷ VSV ÷ 0,01 ÷ T = 7133 × ΔA

II. Tissu, bactéries ou cellules de culture

UN. Concentration en protéines

Définition de l'unité: Une unité d'activité enzymatique est définie comme la quantité d'enzyme catalyse l'absorbance de 0.01 changer 470 nm dans le système de réaction par minute chaque protéine milligramme.

COSSE(U/mg prot)＝ ΔA × VRV ÷(VSV × CPR)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × ΔA ÷ CPR

B. Poids de l'échantillon

Définition de l'unité: Une unité d'activité enzymatique est définie comme la quantité d'enzyme catalyse l'absorbance de 0.01 changer 470 nm dans le système de réaction par minute chaque tissu gram.

COSSE(Poids frais U / g)＝ ΔA × VRV ÷(W × vsv ÷ vs)÷ 0,01 ÷ t = 7133 × Δa ÷ w

C. Montant de la cellule

Définition de l'unité: Une unité d'activité enzymatique est définie comme la quantité d'enzyme catalyse l'absorbance de 0.01 changer 470 nm dans le système de réaction par minute chaque 10 mille bactéries ou cellules.

COSSE(Cellule U/104)＝ ΔA × VRV ÷(500× VSV ÷ vs)÷ 0,01 ÷ t = 14,27 × Δa

Corde: Volume total de réaction, 1.07 ml; Vsv: Volume total de surnageant, 0.015 ml; Contre: Extraire le volume de la solution, 1 ml;

T: Temps de réaction, 1 minute;

Cpr: Concentration de protéines de l'échantillon, mg/ml; W: Poids de l'échantillon, g;

500: Nombre total de bactéries ou de cellules, 5 million.

Note:

1. S'il y a de nombreux échantillons à déterminer en même temps, le mélange de réactif i, II, III et l'eau distillée peuvent être préparées en proportion, et le mélange peut être placé à 37 ℃ (mammifère) ou 25 ℃ (autres espèces) pour plus de 10 minutes. 15 µL d'échantillon et 1055 μL de mélange peut être ajouté pour déterminer.
2. Si Δa est inférieur à 0.005, Le temps de réaction peut être étendu à 5 minutes. Si Δa est supérieur à 0.5 ou il y a plus de bulles dans la solution de réaction, L'échantillon peut être dilué avec l'extrait et déterminé, et la formule de calcul est multipliée par la dilution correspondante.
   

   Les références

   • R . L'activité de la peroxydase comme marqueur biochimique pour la résistance du muskmelon ( CUCUBBUMER MELO ) à Pseudperonospora cubensis[J.]. Phytopathologie, 1992,82(7).
   • Doerge d r , Divi r l , Churchwell m I . Identification du produit d'oxydation coloré du Guaiacol produit par les peroxydases[J.]. Biochimie analytique, 1997,250(1):10-17.

   Produits connexes

   BC0190/BC0195 Polyphénol Oxydase (OPP) Kit d'essai d'activité BC0210 / BC0215 Phénylalanine Ammoniac Lyase (COPAIN) Kit d'essai d'activité BC0170 / BC0175 Superoxyde Dismutase (GAZON) Kit d'essai d'activité BC0200 / BC0205 Catalase (CHAT) Kit de test d'activité