Solarbio Malondialdéhyde (MDA) Kit d'analyse de contenu

Malondialdéhyde (MDA) Kit d'analyse de contenu

Note: Il faut prévoir 2-3 échantillons de grande différence avant la détermination formelle. Équipement d'exploitation: Spectrophotomètre.

Chat non: BC0020

Taille: 50T/48S

Composants:

Composant	Taper	Volume/Quantité	Stockage
Réactif d'extraction	Liquide	60 mL × 1	4°C
Réactif I	Liquide	42 mL × 1	4°C
Réactif II	Poudre	–	4°C
Réactif de travail MDA	Liquide	20 mL Réactif I	4°C
		+ Réactif II
Réactif III	Liquide	12 mL × 1	4°C

Note: La solution efficace pour la détection du MDA est difficile à dissoudre, qui peut être chauffé à 70 ℃ et vibré violemment pour favoriser la dissolution. Ou par traitement ultrasonique pour favoriser la dissolution.

Description du produit:

• Le peroxyde lipidique est généré par l'interaction des radicaux libres d'oxygène avec les acides gras insaturés., formant finalement des composés tels que le malondialdéhyde (MDA). Le niveau de peroxydation lipidique sert d'indicateur, qui peut être évalué en mesurant les niveaux de MDA.
• Dans des conditions acides et à haute température, un composé brun-rouge, 3,5,5-trois méthylsulfaméthoxazole-2,4-deux cétone, est synthétisé via une réaction de condensation entre le MDA et l'acide thiobarbiturique (À déterminer). Ce composé présente une absorption maximale à 532 nm. L'évaluation de la peroxydation lipidique passe par une analyse colorimétrique. Cependant, la présence de sucres solubles peut interférer avec le processus de détection. La réaction des sucres solubles avec le TBA produit une réaction colorée avec des longueurs d'onde d'absorption à 450 nm et 532 nm. Dans ce kit de test, la teneur en MDA est déterminée par la variance de l'absorbance à 532 nm, 450 nm, et 600 nm.
• En raison de la présence de saccharose dans les tissus végétaux et de glucose dans les tissus animaux., le kit comprend deux formules informatiques adaptées au saccharose et au glucose. Ces formules conviennent au bilan lipidique.

Réactifs et équipements requis mais non fournis:

Spectrophotomètre, bain d'eau, centrifugeuse de bureau, pipette de transfert,1 Cuvette en verre ml, mortier/homogénéisateur, glace et eau distillée.

Procédure:

je. La préparation des échantillons:

Bactéries ou cellules:

Recueillir des bactéries ou des cellules dans le tube à centrifuger. 5 des millions de bactéries ou de cellules pourraient être mélangées à 1 mL de réactif d'extraction. Utilisez les ultrasons pour diviser les bactéries et les cellules (placé sur la glace, puissance ultrasonique 200W, temps ultrasonique 3 secondes, intervalle 10 secondes, répéter pour 30 fois). Centrifuger à 8000 ×g pour 10 minutes à 4℃ pour éliminer les matières insolubles, et prendre le surnageant sur la glace avant de tester.

Tissu:

0.1 g de tissu pourrait être mélangé avec 1 mL de réactif d'extraction et entièrement homogénéisé sur bain de glace. Centrifuger ensuite à 8000 ×g pour 10 minutes à 4℃ pour éliminer les matières insolubles, et prendre le surnageant sur la glace avant de tester.

Sérum:

Détecter

II. Détermination procédure:

1. Préchauffer le spectrophotomètre pendant plus de 30 minutes, mettre à zéro avec distillé
2. Ajoutez des réactifs avec la liste suivante:

Réactif (µL)	Tube à essai (T)	Tube vierge (B)
Réactif de travail MDA	600	600
Échantillon	200	–
Eau distillée	–	200
Réactif Ⅲ	200	200

Le mélange serait incubé à 100℃ pendant 60 minutes (bien fermer pour éviter la perte d’humidité), refroidi sur glace, et centrifugé à 10000 ×g pour 10 minutes à température ambiante pour éliminer les matières insolubles. Incorporer le surnageant 1 Cuvette en verre ml, et mesurer l'absorbance à 450 nm, 532 nm et 600 nm.

∆A450=A450(T)-A450(B), ∆A532=A532(T)-A532(B), ∆A600 =A600(T)-A600(B). Le tube vierge doit être testé une ou deux fois.

III. Calcul:

1. Tissu, bactéries ou cellules cultivées

• Concentration en protéines:

MDA (nmol/mg prot)=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×Vrv÷(Cpr×Vs)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷Cpr

• Poids de l'échantillon:

MDA (nmol/g de poids)=( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)÷W

• Montant de la cellule:

MDA (nmol/104cellule)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29×A∆450)×Vrv÷(400×Vs÷Vsv)

=0,01×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)

• Sérum:

MDA (nmoles/mL)=(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. Tissu végétal:

• Poids de l'échantillon

MDA (nmol/g de poids)= (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷W

• Concentration en protéines:

MDA (nmol/mg prot)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)×Vrv÷(Cpr×Vs)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷Cpr

Corde: Volume total de réaction, 1 ml; Contre: Volume d'échantillon, 0.2 ml;

Vsv: Volume d'extraction, 1 ml;

Cpr: Concentration de protéines de l'échantillon, mg/ml; W: Poids de l'échantillon, g;

400: Nombre total de bactéries et de cellules, 5 million.

Note:

S'il s'avère que la valeur d'absorbance de l'échantillon est trop faible, la durée du bain-marie bouillant peut être réglée de 60 minutes pour 90 minutes ou plus. La détection du MDA dans la même expérience doit être étendue au même moment pour éviter les erreurs.

Les références

• Spitz D R, Oberley L W. Un test pour l'activité de la superoxyde dismutase dans les homogénats de tissus de mammifères[J.]. Biochimie analytique,1989
• Masayasu M., Hiroshi Y.. Une méthode de dosage simplifiée de l'activité de la superoxyde dismutase à usage clinique[J.]. Clinique Chimique

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