Solarbio Hydrogène Peroxyde (H2O2) Kit d'analyse de contenu

Attribut	Détails
Note	Prenez deux ou trois échantillons différents pour la prédiction avant le test
Instrument de détection	Spectrophotomètre / Lecteur de microplaques
Chat non	BC3595
Taille	100T/96S

Composants:

Réactif I: Acétone 100 ml × 1. Stockage à 4℃. (Réactif fourni soi-même)

Réactif Ⅱ: Poudre × 1. Stockage à 4℃. Solution de travail: Ajouter l'acide chlorhydrique concentré 3 ml (37%) Avant utilisation, entièrement dissous. Réactifs inutilisés stockés à 4 °C.

Réactif Ⅲ: 6mL×1. Stockage à 4℃.

Réactif Ⅳ: 30mL×1. Stockage à 4℃.

Standard: 1mL×1, 1Solution standard MMOL / ML H2O2. Stockage à 4℃.

Description du produit:

H2O2 est les molécules d'oxygène réactives les plus courantes dans les organismes. Il est principalement produit par la catalyzation de SOD et XOD et dégradé par la catalyzation du chat et du pod. H2O2, qui n'est pas seulement l'un des importants de l'oxygène réactif, mais aussi le centre de conversion mutuelle de l'oxygène réactif. D'une part, H2O2 peut oxyder directement ou indirectement les acides nucléiques intracellulaires, protéines et autres macromolécules biologiques, et endommager les membranes cellulaires, accélérant ainsi le vieillissement et la désintégration des cellules. D'autre part, H2O2 est également un facteur de régulation clé dans de nombreuses réactions d'urgence oxydative.

H2O2 et le sulfate de titane génèrent un complexe de peroxyde de titane jaune avec l'absorption caractéristique à 415 nm.

Réactifs et équipements requis mais non fournis.

Spectrophotomètre/lecteur de microplaques, centrifugeuse de bureau, pipette réglable, cuvette en verre micro/plaque à fond plat de 96 puits, pipette de transfert, Acide sulfurique concentré en acétone (37% HCl), mortier et glace.

Procédure:

je. Extraction d'échantillon:

1. 1. Échantillon bactérien ou cellulaire: recueillir un échantillon bactérien ou cellulaire pour centrifuger, jeter le surnageant; suggéré 5 millions avec 1 ml de régent I, division des bactéries et des cellules avec ultrasonication (pouvoir 20%, temps de travail 3s, intervalle 10s, pour 30 fois); centrifugeuse à 8000g et 4 ℃ pour 10 min, Le surnageant est placé sur la glace pour le test.
   2. Tissu: prendre 0,1 g de tissu ajouter 1 Ml Regent I, broyer complètement sur la glace. Centrifuger à, 8000g et 4 ℃ pour 10 min, Le surnageant est placé sur la glace pour le test.
   3. Sérum: Selon la proportion de 100 μl de sérum (plasma) Ajouter 0,9 ml de régent I, bien mélanger. Centrifugeuse à 8000g et 4 ℃ pour 10 min, Le surnageant est placé sur la glace pour le test.

II. Détermination procédure:

• Préchauffer le spectrophotomètre/lecteur de microplaques pour 30 min, ajuster la longueur d'onde à 415 nm, mettre à zéro avec de l'eau distillée.
• Incuber la solution ⅱ, Ⅲ et ⅳ à 37 ℃(mammifères) ou 25 ℃ (Autres animaux) bain d'eau pour plus de 10 Min minutes.
• Solution de travail standard: Si vous utilisez une plaque à 96 puits, Diluer la solution standard 1 mmol / ml à une solution standard 2 μmol / ml avec de l'acétone, et utilisez une méthode colorimétrique en verre de trace pour diluer la solution standard de 1 mmol / ml pour une solution standard de 1 μmol / ml
• Ajoutez des réactifs avec la liste suivante (réaction dans le tube EP):

Réactif (µL)	Éprouvette (À)	Tube standard (COMME)	Tube de commande (CA)
Échantillon	250
Solution de travail standard		250
Régent Ier			250
Régent II	25	25	25
Régent III	50	50	50
4000g, centrifugeuse à température ambiante pour 10 minutes, jeter un surnageant.
Régent IV	250	250	250

Ajouter le régent ⅳ pour dissoudre le précipité (l'étape peut éliminer le pigment végétal avec de l'acétone pour 3-5 fois), et le placer à température ambiante pour 5 min, Transfert 200 μl à une cuvette micro-verre ou à une plaque à 96 puits et mesurer l'absorbance à 415 nm. Le tube de commande n'a besoin d'être testé qu'une ou deux fois. Calculer ∆at = at-ac, ∆as = as-AC.

III. Calcul (Pour la microplaque lecteur)

UN. 96-Bien plaque

• Quantité de cellules

H2O2(μmol /104 cellule) = ∆at ÷(∆as ÷ c)× vs ÷(500× vs ÷ ve)= 0,004 × ∆at ÷ ∆as

• Poids de l'échantillon

H2O2(μmol / g)= ∆at ÷(∆as ÷ c)× V1 ÷(Vs ÷ ve × w)= 2 × ∆at ÷ ∆as ÷ w

• Concentration en protéines

H2O2(μmol / mg prot)= ∆at ÷(∆as ÷ c)× vs ÷(Cpr×Vs)= 2 × ∆at ÷ ∆as ÷ cpr

• Sérum (plasma)volume

H2O2(µmol/mL)= ∆at ÷(∆as ÷ c)× 10 = 20 × ∆at ÷ ∆as

500: quantité de cellules ou de bactéries, 104;

C: Concentration de la solution standard H2O2, 2µmol/mL;

Contre: volume de l'échantillon, 0.25 ml; W: Poids de l'échantillon, g;

Ve: volume d'extraction, 1 ml;

Cpr: concentration en protéines de l'échantillon, mg/ml;

10: dilution sérique multiple. [0.1sérum ML (plasma)+0.9Ml Regent I]± 0,1 ml de sérum(plasma)= 10.

B. micro verre cuvette:

Modifier la concentration de C-2 μmol / ml standard dans la formule ci-dessus en C-1 μmol / ml pour le calcul.

Note:

1. Comme solution, Je suis facilement volatile, Solution Je dois être pré-refroidie avant utilisation. Il doit être broyé sur la glace lors du broyage.
2. La solution de ce kit est facilement volatile. Veuillez apporter des gants et des masques jetables.
3. Si la valeur d'absorbance de l'échantillon est supérieure à 1.1, Il est recommandé de diluer l'échantillon avec Reagent I avant d'effectuer la mesure.

Exemples expérimentaux:

1. Prendre 0.1 g de cœur et ajouter 1 ML de réactif I pour le traitement des échantillons. Après centrifugation pour prendre tout le surnageant, procéder selon la procédure de détermination. Après détermination avec 96 assiette bien à fond plat, calculer ∆at = at-ac = 0,083-0.046 = 0,039, ∆as = AS-AC = 0,824-0.046 = 0,778. Le contenu est calculé en fonction de la masse de l'échantillon.

H2O2(μmol / g) = 2 × ∆at ÷ ∆as ÷ w = 1 μmol / g.

2. Prendre 0.1 g de thé et ajouter 1 ML de réactif I pour le traitement des échantillons. Après centrifugation pour prendre tout le surnageant, procéder selon la procédure de détermination. Après détermination avec 96 assiette bien à fond plat, calculer ∆at = at-ac = 0,258-0,003 = 0,255, ∆as = AS-AC = 0,637-0,003 = 0,634. Le contenu est calculé en fonction de la masse de l'échantillon.

H2O2(μmol / g) = 2 × ∆at ÷ ∆as ÷ w = 4,5 μmol / g.

Les références：

• Satterfield C n, Bonnell une interférence dans la méthode du sulfate de titane pour le peroxyde d'hydrogène[J.].

Chimie analytique, 1955, 27(7): 1174-1175.

• Amin V M, Olson n f. Détermination spectrophotométrique du peroxyde d'hydrogène dans le lait[J.]. Journal of Dairy Science, 1967, 50(4):461-464.
• Sima et h, Yao J M, Tenir y s, et autres. Variations du peroxyde d'hydrogène et de l'expression de la catalase chez les œufs de bombyx pendant l'initiation et la terminaison de la diapause[J.]. Archives de la biochimie et de la physiologie des insectes, 2011, 77(2): 72-80.

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Spécifications techniques:

Limite de détection ：0.0027 µmol/mL

Plage linéaire：0.0195-3 µmol/mL