Protéine BCA Kit d'analyse

Chat: PC0020

Taille: 500T (Lecteur de microplaques) / 50T (Spectrophotomètre)

Stockage: L'étalon de protéine BSA est stocké à 4 ℃ pendant 3 mois， ou à -20℃ pour 1 année, les autres réactifs se conservent à température ambiante pendant 1 année

Composants:

	500T (50T)	Stockage
Réactif BCA	100ml	RT
Avec réactif	3ml	RT
Dilution PBS	30ml	RT
Norme BSA(5mg/ml de surface corporelle)	1ml	-20℃

Description du produit:

• Le principe du BCA Protein Assay Kit:
  • Basé sur la réduction de Cu^2+ en Cu^+ par les protéines.
  • BCA forme un complexe violet-bleu avec Cu^+ dans des conditions alcalines.
  • L'absorbance est détectée à 562 nm.
  • La quantification des protéines se fait en comparant l'absorbance avec une courbe standard.
• Compatibilité avec les détergents:
  • Les détergents courants comme FDS, Triton X-100, et Tween n'affectent pas les résultats des tests.
• Sensibilité à certains agents:
  • Affecté par les agents chélateurs (EDTA, GECT), agents réducteurs (TNT, mercaptoéthanol), et les lipides.
• Considérations de fond élevées:
  • En cas de bruit de fond élevé dû à la dilution de l'échantillon ou au lysat, envisagez d'utiliser le kit de test de protéines Bradford.

Protocole

UN. MicroplaqueLecteur

1. Solution de travail BCA

Diluer 1 volume de réactif Cu avec 50 volumes de réactif BCA (1:50). En cas de précipitations, il disparaîtra après le mélange. Le réactif de travail BCA peut être conservé à température ambiante pendant 24 heures.

2. Solution de travail standard BSA

Diluer 10μl de BSA (5mg/ml) avec du PBS jusqu'à 100μl (0.5mg/ml). Ajouter 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20µl de solution de travail étalon BSA (0.5mg/ml) à 96 plaques à puits, ajouter du PBS jusqu'à 20μl.

3. Diluer correctement l'échantillon. Il vaut mieux faire plusieurs dégradés, tel que 2, 4, et 8 fois dilution. Ajouter 20 μl d’échantillon à 96 puits

Note: Pour éviter les erreurs dans les étapes de fonctionnement, faire le point de prélèvement situé à 1/2 derrière la ligne standard autant que possible, car la pipette a une erreur importante lors du prélèvement d'une petite quantité d'échantillon, et le point devant la ligne standard peut ne pas être très précis.

4. Réaction BCA

Ajoutez 200 μl de solution de travail BCA à 96 plaques à puits, et incuber à 37℃ pendant 15-30min. Mesure

l'absorbance à 562 nm, et tracez une courbe standard pour calculer la teneur en protéines de l'échantillon. Évitez que l'évaporation de l'eau n'affecte les résultats des tests lors de l'utilisation d'un incubateur.

B. Spectrophotomètre

1. Solution de travail BCA

Diluer 1 volume de réactif Cu avec 50 volumes de réactif BCA (1:50). En cas de précipitations, il disparaîtra après le mélange. Le réactif de travail BCA peut être conservé à température ambiante pendant 24 heures.

2. Solution de travail standard BSA

Diluer 100μl de BSA (5mg/ml) avec PBS jusqu'à 1 ml (0.5mg/ml).

3. Préparez-en huit (ou plus) 5tubes à centrifuger ml, et ajoutez les réactifs comme suit:

Tubes à centrifuger Non.	1	2	3	4	5	6	7 (échantillon 1)	8 (échantillon 2)	9 (échantillon 3)
Solution de travail standard BSA	0	40µl	80µl	120µl	160µl	200µl	200µl	200µl	200µl
PBS	200µl	160µl	120µl	80µl	40µl	0	0	0	0
Solution de travail BCA	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml	2ml

Note

Incuber à 37 ℃ pendant 15-30 minutes. Mesurer l'absorbance à 562 nm, et tracez une courbe standard pour calculer la teneur en protéines de l'échantillon. Évitez que l'évaporation de l'eau n'affecte les résultats des tests lors de l'utilisation d'un incubateur.

1. Le réactif Cu et la dilution PBS peuvent être stockés entre 2 et 8 ℃ lorsque le réactif n'est pas utilisé pendant une longue période. Lorsque le réactif BCA cristallise et précipite à basse température, il peut être incubé à 37 ℃ pour se dissoudre complètement sans affecter son utilisation.
2. Si l'échantillon contient beaucoup de substances interférentes, veuillez utiliser le BCA Protein AssayKit (PC0020).
3. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des gants et un masque de gaze

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