Small Amount Tissue microRNA Extraction kit

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0333	SN0334
Colonnes d'extraction d'ARN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Colonnes de nettoyage d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Extraction d'ARN Buffer II	30ml	2×30 ml
Tampon d'élimination des inhibiteurs	30ml	2×30 ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2×15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Manuel d'instructions	1	1

 

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) à l'état sec et est stable pendant 12 mois.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit est destiné à des fins de recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit contiennent des irritants; il est conseillé de prendre les précautions nécessaires (comme porter des vêtements de protection et des lunettes).

3.3 L'utilisation de ce kit nécessite un équipement supplémentaire tel qu'une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, l'azote liquide, chloroforme, eau déminéralisée stérile, et tubes EP.

4. Introduction au kit de réactifs

This microRNA purification kit provides a fast and efficient method for purifying microRNA from various tissues, suitable for most species. Tissues exceeding 100 mg can be processed using this RNA purification kit. The kit employs special DNA cleanup column technology to remove genomic DNA and large RNA fragments during the experimental process. En général, additional digestion on DNA columns is not required, preventing microRNA degradation.

The RNA rapid purification kit can extract plant microRNA within 1 heure. The extracted microRNA can be directly used for RT-RAP, Transfert du Nord, etc.. L'ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme, making the microRNA purification kit suitable for various other samples.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Précautions avant de commencer l'expérience:

UN. Avant utilisation, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre à Laver Tampon 1 selon l'étiquette sur le flacon de réactif, and mark a check on the label to indicate the addition of anhydrous ethanol.

B. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE containing a minimal amount of EDTA. Si l'EDTA a un impact sur les expériences ultérieures, it is recommended to use sterile deionized water instead of Elution Buffer.

1. Traitement des échantillons:

UN. Plant or Animal Tissues: Collect fresh tissues whenever possible. For plant and animal tissues, grind with liquid nitrogen, then quickly add 500μl of RNA Extraction Buffer II. Invert and mix thoroughly, avoiding tissue clumps in the lysate to prevent RNA degradation.

B. Cell Tissues: Collect fresh growing cells in a 1.5 tube à centrifuger ml, centrifuger à 13,000 tr/min pour 1 min, collect cells, ajouter 500μl of RNA Extraction Buffer II, vortex and shake well.

2. Incuber à56℃ pour 1-3 min. If the sample has a high polysaccharide content, it is advisable to skip this step.

3. Vortex pour 30 seconde.

4. Centrifuger le lysat pour 10 min at 14,000 tr/min (20,000×g).

(Note: Polysaccharides from plant materials may result in sticky substances at this step, which can cut DNA in subsequent steps. Remove these substances during this step. Après centrifugation, transfer the supernatant to a new Purification de l'ADN column.)

5. Add the obtained supernatant to the DNA cleanup column (environ 650-700μl à chaque fois), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 min, récupérer le filtrat (microRNA is in the filtrate at this point).
6. Estimate the volume of the filtrate accurately, ajouter 0.5 times the volume of absolute ethanol. If there is a small amount of precipitation, cela n'affecte pas les expériences ultérieures. Add the liquid to the RNA purification column, centrifuger à 13,000 tr/min pour 1 min.
7. Discard the waste and place the RNA purification column in a collection tube for the next step.
8. Ajouter 600µl de tampon d’élimination des inhibiteurs, centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 min, jeter les déchets, and place the RNA purification column back into the collection tube for the next step.
9. Ajouter 700µl de tampon de lavage 1 à la colonne de purification d'ARN, centrifuger à 14,000 tr/min (20,000×g) pour 2 min, extend the centrifugation time appropriately to ensure a drier membrane.

(Note: Confirm the addition of absolute ethanol to Wash Buffer 1. The presence of ethanol has a severe impact on subsequent experiments. Donc, membrane dryness is crucial. Après centrifugation, ensure the absence of ethanol before elution, jeter les déchets, and collect the tube.

Après lavage avec Wash Buffer 1, la membrane de la colonne de purification d'ARN ne doit avoir qu'une légère couleur. Après centrifugation, retirer délicatement la colonne de purification d'ARN, ensuring it does not touch the collection tube to avoid ethanol interference.)

10. Place the RNA purification column into a new centrifuge tube, ajouter 100µl de tampon d'élution à la membrane, incuber à température ambiante pendant 5 min (15℃ to 25℃), centrifuger à plus 8,000 tr/min pour 1 min.

(Note: Eluting RNA with 50μl of Elution Buffer can increase RNA concentration but decrease total RNA yield.)

11. Répétez l'étape précédente.

Note: A new centrifuge tube can be used to collect the RNA eluted the second time, or the original collection tube can be used to continue collecting RNA.