Le kit permet une purification rapide de l'ARN de haute qualité à partir du tube d'ARN sanguin paxigene à l'aide de colonnes de centrifugation à membrane de silice.. L'ARN purifié à l'aide du système HiPure est prêt pour des applications telles que la RT-RAP, Transfert du Nord, ARN poly A+ (ARNm) purification, protection contre les nucléases, et traduction in vitro.
Détails
Caractéristiques
| Caractéristiques | Caractéristiques |
| Fonctions principales | Isolement de l'ARN total des tubes d'ARN Paxgene |
| Applications | RT-PCR, qPCR, Hybridation nordique, NGS, protection des acides nucléiques, traduction in vitro |
| Méthode de purification | Mini colonne de rotation |
| Technologie de purification | Technologie de la silice, Technologie de filtration de l'ADN |
| Méthode de processus | Manuel (centrifugation ou vide) |
| Échantillon type | Sang dans le tube de conservation |
| Montant de l'échantillon | 2.5ml |
| Volume d'élution | ≥30µl |
| Volume de liquide transporté par colonne | 800µl |
| Rendement de liaison de la colonne | 100µg |
Principe
Le kit est destiné à la purification de l'ARN total de 2.5 ml de sang total humain collecté dans un tube à ARN sanguin PAXgene. La purification commence par une étape de centrifugation pour sédimenter les acides nucléiques dans le tube à ARN sanguin PAXgene.. Le culot est lavé et remis en suspension, et incubé dans des tampons optimisés avec la protéinase K. Lavage d'ADN Le lysat est passé à travers une colonne DNA Mini. De l'éthanol est ajouté pour ajuster les conditions de liaison, et le lysat est appliqué sur une colonne. L'ARN est sélectivement lié à la membrane de silice lorsque les contaminants passent à travers. Les contaminants restants sont éliminés en plusieurs étapes de lavage efficaces. Entre la première et la deuxième étape de lavage, la membrane est traitée avec de la DNase I pour éliminer les traces d'ADN lié. Après les étapes de lavage, L'ARN est élué dans le tampon d'élution et dénaturé par la chaleur.
Avantages
- Haute qualité – l'ARN total de haute pureté peut être directement utilisé dans diverses applications sensibles en aval
- Rapide – l'isolement de plusieurs échantillons peut être réalisé en 40 minutes en utilisant la méthode de purification sur colonne
- Sécurité – aucune extraction au phénol-chloroforme n'est requise
- Sensible – lyse directe du sang, plasma, et autres échantillons sans séparation des leucocytes
Contenu du kit
| Contenu | R416802 | R416803 |
| Temps de purification | 10 Préparations | 50 Préparations |
| Mini-colonnes HiPure RNA I | 10 | 50 |
| Mini-colonnes de filtre d'ADNg | 10 | 50 |
| 2Tubes de prélèvement ml | 30 | 150 |
| Eau sans RNase | 60 ml | 250 ml |
| Tampon MBR1 | 10 ml | 30 ml |
| Tampon MBR2 | 5 ml | 15 ml |
| Tampon RW1 | 15 ml | 60 ml |
| Tampon RW2* | 6 ml | 20 ml |
| Protéinase K | 12 mg | 50 mg |
| Tampon de dissolution de protéase | 1.8 ml | 5 ml |
| DNase I | 120 µl | 600 µl |
| Tampon DNase | 6 ml | 30 ml |
Stockage et stabilité
La protéinase K doit être conservée entre 2 et 8 °C à son arrivée. DNase I doit être conservé à -20°C. Cependant, stockage à court terme (DNase je vais jusqu'à 1 semaines, Protéinase K jusqu'à 8 semaines) à température ambiante (15–25°C) n'affecte pas leurs performances. Les composants restants du kit peuvent être conservés à température ambiante (15–25°C) et sont stables pendant au moins 18 mois dans ces conditions.
Données d'expérimentation
Commentaires
Il n'y a pas encore de critiques.