Kit d'extraction d'ADN génomique sanguin

1. Composants du kit de réactifs

Caractéristiques	50T	100T
Chat. Non.	SN0219	SN0220
Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble)	50 (ensemble)	100 (ensemble)
Tampon réactif B	20 ml	2 × 20 ml
Tampon réactif C	30 ml	2 × 30 ml
10×Red Blood Cell Lysis Buffer	60 ml	2 × 60 ml
Tampon de lavage 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampon d'élution	20 ml	20 ml
Protéinase K	1ml	2x1ml
RNASEA	1ml	2x1ml
Manuel d'instructions	1	1

2. Stockage

Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.

3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs

3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..

3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.

3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.

4. Introduction au kit de réactifs

The Blood Purification de l'ADN Reagent Kit offers a rapid and effective method for purifying DNA from blood and other bodily fluids. By lysing red blood cells with a red blood cell lysis buffer, DNA can be efficiently collected.

 

The Blood DNA Rapid Purification Kit can extract total DNA from whole blood (y compris le sang, sérum, plasma, and other bodily fluids) dans 30 minutes. The entire purification process doesn’t require toxic reagents such as phenol-chloroform. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.

5. Principes et procédures expérimentaux

6. Processus d'extraction

Avant de commencer l'expérience:

UN. Red Blood Cell Lysis Buffer 1x Preparation: Dilute the 10x Red Blood Cell Lysis Buffer to 1x volume using RNase-free water.

B. Reagent Buffer B and Reagent Buffer C may precipitate at low temperatures. It is recommended to heat at 65℃ for 5 minutes to dissolve the precipitate before use.

C. Prior to using Tampon de lavage 1, add the specified amount of anhydrous ethanol as indicated on the reagent bottle label, and mark a check on the label to indicate ethanol addition.

D. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE with minimal EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, it is suggested to substitute Elution Buffer with sterile deionized water.

1. Manipulation des échantillons: (Collecter 0.1-5 ml blood samples)

UN. Ajouter 2-3 times the volume of 1x Red Blood Cell Lysis Bufferto the blood or sample (Dilute the Red Blood Cell Lysis Buffer 10x to 1x before use), bien mélanger, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, carefully remove the supernatant. The precipitate should theoretically be white or pale red. Add Reagent Buffer B to the precipitate (for 0.1-1ml blood samples, ajouter 200µLTampon réactif B; for 1-2ml blood samples, ajouter 400µL Tampon réactif B).

B. If handling samples from low-level organisms like poultry or birds with nucleated red blood cells, a smaller sample volume is needed. In such cases, omit the 1x Red Blood Cell Lysis Buffer and directly add 400µLof Reagent Buffer B and 20µL of RNaseA (10 mg/ml), bien mélanger, et incuber à température ambiante pendant 5 minutes.

2. Ajouter 10µLRNASEA (10 mg/ml), 20µL Protéinase K (10 mg/ml), bien mélanger, digest at 65℃ for 10 minutes. Pendant cette période, inverser et mélanger 2-3 fois jusqu'à ce que la digestion soit terminée.

3. Ajouter 200µLof Reagent Buffer C au lysat, mix by pipetting, ajouter 200µL of anhydrous ethanol, mix by pipetting.

4. Apply the obtained liquid to the DNA extraction purification column (ensemble) (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets collectés, and re-insert the collection tube into the DNA extraction purification column (ensemble) pour la prochaine étape.

5. Ajouter 700µLof inhibition removal buffer, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets.

6. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) in a new collection tube, ajouter 500µLof Wash Buffer 1, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets, et réinsérer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) into the collection tube for the next step.

(Note: Ensure anhydrous ethanol has been added to Wash Buffer 1.)

7. Répétez l'étape 6.

8. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) dans un nouveau tube à centrifuger, uncover, incubate at 65℃ in a water bath for 2 minutes. Extend this step appropriately to evaporate ethanol as much as possible to prevent ethanol residue from affecting downstream experiments.

9. Suspend 50-100µLof Elution Buffer onto the membrane of the column, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, and collect the DNA.

(Note: 1. Élution de l'ADN avec 50µL of Elution Buffer can increase DNA concentration but reduces total DNA yield; 2. The eluted DNA wash can be reapplied to the DNA extraction purification column. Centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute again to increase DNA yield.