1. Composants du kit de réactifs
| Caractéristiques | 50T | 100T |
| Chat. Non. | SN0219 | SN0220 |
| Colonnes d'extraction d'ADN (ensemble) | 50 (ensemble) | 100 (ensemble) |
| Tampon réactif B | 20 ml | 2 × 20 ml |
| Tampon réactif C | 30 ml | 2 × 30 ml |
| 10×Tampon de lyse des globules rouges | 60 ml | 2 × 60 ml |
| Tampon de lavage 1 | 15 ml | 2 × 15 ml |
| Tampon d'élution | 20 ml | 20 ml |
| Protéinase K | 1ml | 2x1ml |
| RNASEA | 1ml | 2x1ml |
| Manuel d'instructions | 1 | 1 |
2. Stockage
Ce kit de réactifs doit être conservé à température ambiante (15-25℃) et dans des conditions sèches, avec une durée de conservation de 12 mois. Les colonnes de purification par extraction d'ADN peuvent être stockées pendant 1 année dans un environnement frais et sec. Protéinase K et RNase A contiennent des conservateurs, permettant le transport à température ambiante, mais pour un stockage à long terme, ils doivent être conservés à -20℃.
3. Instructions d'utilisation du kit de réactifs
3.1 Ce kit de réactifs est destiné à la recherche en biologie moléculaire et ne doit pas être utilisé pour le diagnostic ou le traitement de maladies..
3.2 Certains composants du kit de réactifs contiennent des irritants. Des mesures de protection telles que le port de vêtements et de lunettes de protection sont recommandées.
3.3 Pendant l'utilisation de ce kit de réactifs, une centrifugeuse à grande vitesse, bain d'eau (bain en métal), mélangeur de vortex, éthanol anhydre, eau déminéralisée stérile, et les tubes EP doivent être préparés par l'utilisateur.
4. Introduction au kit de réactifs
Le sang Purification de l'ADN Le kit de réactifs offre une méthode rapide et efficace pour purifier l'ADN du sang et d'autres fluides corporels. En lysant les globules rouges avec un tampon de lyse des globules rouges, L'ADN peut être collecté efficacement.
Le kit de purification rapide de l'ADN sanguin peut extraire l'ADN total du sang total (y compris le sang, sérum, plasma, et autres fluides corporels) dans 30 minutes. L’ensemble du processus de purification ne nécessite pas de réactifs toxiques tels que le phénol-chloroforme. L'ADN extrait peut être directement utilisé pour RAP, Southern Blot, et d'autres applications.
5. Principes et procédures expérimentaux
6. Processus d'extraction
Avant de commencer l'expérience:
UN. Tampon de lyse des globules rouges 1x Préparation: Diluer le tampon de lyse des globules rouges 10x à 1x le volume en utilisant de l'eau sans RNase.
B. Tampon réactif B et tampon réactif C peut précipiter à basse température. Il est recommandé de chauffer à 65 ℃ pendant 5 minutes pour dissoudre le précipité avant utilisation.
C. Avant d'utiliser Tampon de lavage 1, ajouter la quantité spécifiée d'éthanol anhydre comme indiqué sur l'étiquette du flacon de réactif, et cochez l'étiquette pour indiquer l'ajout d'éthanol..
D. Le tampon d'élution est un 0.1x solution TE avec un minimum d'EDTA. Si l'EDTA peut affecter les expériences ultérieures, il est suggéré de remplacer le tampon d'élution par de l'eau déionisée stérile.
- Manipulation des échantillons: (Collecter 0.1-5 ml d'échantillons de sang)
UN. Ajouter 2-3 fois le volume de 1x Tampon de lyse des globules rougesau sang ou à l'échantillon (Diluer le tampon de lyse des globules rouges 10x à 1x avant utilisation), bien mélanger, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, retirer soigneusement le surnageant. Le précipité doit théoriquement être blanc ou rouge pâle. Ajouter le tampon réactif B au précipité (pour échantillons de sang de 0,1 à 1 ml, ajouter 200µLTampon réactif B; pour 1 à 2 ml d'échantillons de sang, ajouter 400µL Tampon réactif B).
B. Si vous manipulez des échantillons provenant d'organismes de faible concentration comme des volailles ou des oiseaux contenant des globules rouges nucléés, un volume d'échantillon plus petit est nécessaire. Dans de tels cas, omettez le tampon de lyse des globules rouges 1x et ajoutez directement 400µLde tampon réactif B et 20µL de la RNaseA (10 mg/ml), bien mélanger, et incuber à température ambiante pendant 5 minutes.
2. Ajouter 10µLRNASEA (10 mg/ml), 20µL Protéinase K (10 mg/ml), bien mélanger, digérer à 65℃ pendant 10 minutes. Pendant cette période, inverser et mélanger 2-3 fois jusqu'à ce que la digestion soit terminée.
3. Ajouter 200µLde tampon réactif C au lysat, mélanger par pipetage, ajouter 200µL d'éthanol anhydre, mélanger par pipetage.
4. Appliquer le liquide obtenu sur la colonne de purification par extraction d'ADN (ensemble) (environ 650 ~ 700 μl à chaque fois), centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets collectés, et réinsérez le tube de prélèvement dans la colonne de purification par extraction d'ADN (ensemble) pour la prochaine étape.
5. Ajouter 700µLde tampon de suppression d'inhibition, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets.
6. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) dans un nouveau tube de prélèvement, ajouter 500µLde tampon de lavage 1, centrifuger à 12,000 tr/min pour 30 secondes, jeter les déchets, et réinsérer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) dans le tube de collecte pour l'étape suivante.
(Note: Assurez-vous que de l'éthanol anhydre a été ajouté au tampon de lavage. 1.)
7. Répétez l'étape 6.
8. Placer la colonne de purification d'extraction d'ADN (ensemble) dans un nouveau tube à centrifuger, découvrir, incuber à 65℃ dans un bain-marie pendant 2 minutes. Prolongez cette étape de manière appropriée pour évaporer l'éthanol autant que possible afin d'éviter que les résidus d'éthanol n'affectent les expériences en aval..
9. Suspendre 50-100µLde tampon d'élution sur la membrane de la colonne, centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute, et collecter l'ADN.
(Note: 1. Élution de l'ADN avec 50µL de tampon d'élution peut augmenter la concentration d'ADN mais réduit le rendement total en ADN; 2. Le lavage d'ADN élué peut être réappliqué à la colonne de purification d'extraction d'ADN. Centrifuger à 12,000 tr/min pour 1 minute encore pour augmenter le rendement en ADNd.
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