Kit de extracción de ADN de muestra de esperma de Seno

1. Componentes del kit de reactivos

Especificaciones	50t	100t
Gato. No.	SN0253	SN0254
Columnas de extracción de ADN (colocar)	50 (colocar)	100 (colocar)
Buffer reactivo sp	20 ml	2 × 20 ml
Tampón reactivo C	30 ml	2 × 30ml
Tampón de lavado 1	15 ml	2 × 15 ml
Tampón de elución	20 ml	20 ml
Proteinasa K	1ml	2x1ml
ARNasaA	1ml	2x1ml
Manual de instrucciones	1	1

2. Almacenamiento

Este kit de reactivos debe almacenarse a temperatura ambiente. (15-25℃) y en condiciones secas, con una vida útil de 12 meses. Las columnas de purificación y extracción de ADN se pueden almacenar durante 1 año en un ambiente fresco y seco. Proteinasa K y ARNasa A contienen conservantes, permitiendo el transporte a temperatura ambiente, pero para almacenamiento a largo plazo, deben mantenerse a -20 ℃.

3. Instrucciones para usar el kit de reactivos

3.1 Este kit de reactivos está destinado a la investigación de biología molecular y no debe utilizarse para el diagnóstico o tratamiento de enfermedades..

3.2 Algunos componentes del kit de reactivos contienen irritantes.. Se recomiendan medidas de protección como el uso de ropa y gafas protectoras..

3.3 Durante el uso de este kit de reactivos, una centrífuga de alta velocidad, baño de agua (baño de metal), mezclador Vortex, etanol anhidro, agua desionizada estéril, y los tubos EP deben ser preparados por el usuario.

4. Introducción al kit de reactivos

La muestra de esperma extracción de ADN genómico El kit proporciona una solución de purificación rápida y eficiente para el ADN de la muestra de esperma. Logra una muestra purificación de ADN efectivamente a través de un sistema de tampón de extracción dedicado combinado con columnas específicas de purificación de ácido nucleico.

Este kit puede extraer ADN de muestra de esperma dentro 30 minutos, y todo el proceso de purificación no requiere reactivos tóxicos como fenol-cloroformo. El ADN extraído se puede utilizar directamente para PCR, transferencia del sur, y otras aplicaciones.

5. Principios y procedimientos experimentales

6. Proceso de extracción

Antes de comenzar el experimento:

A.Buffer reactivo sp:Este búfer debe almacenarse a largo plazo en un entorno entre 2 ℃ y 8 ℃

B.Tampón reactivo C puede precipitar en condiciones de baja temperatura. Se recomienda calentar a 65 ℃ durante 5 minutos. Después del precipitado se disuelve, se puede utilizar normalmente.

C.Tampón de lavado 1: Antes de usar, agregue la cantidad especificada de etanol anhidro como se indica en la etiqueta de la botella de reactivo. Marque una verificación de la etiqueta para indicar la adición de etanol anhidro.

D. El tampón de elución es un 0.1x solución TE que contiene una cantidad mínima de EDTA. Si EDTA tiene un impacto en los experimentos posteriores, Se recomienda usar agua desionizada estéril como sustituto del tampón de elución.

1. Procesamiento de muestras:

Pipeta 200µl de esperma congelado, incubar a 75 ℃ para 10 minutos hasta que la muestra de esperma no sea viscosa. Centrifugar en 12000 rpm para 5 minutos, Aspirar al sobrenadante tanto como sea posible, y las células de los espermatozoides se sedimentarán en la parte inferior del tubo.

2. Agregar al sedimento del paso anterior: 400μl de tampón de reactivo SP, 20μl proteinasa k (10 mg/ml), 20μl rnasea (10 mg/ml).Digerir a 65 ℃ para 10 minutos, invertir y mezclar 6-7 tiempos durante la digestión hasta que la muestra esté completamente digerida.
3. Agregue un volumen igual de Tampón reactivo C y un volumen igual de etanol anhidro, y mezclar bien por pipeteo.

(Por ejemplo: Si agrega 400 μl de tampón de reactivo IV, Deberá agregar aproximadamente 460 μl de tampón reactivo C y 460 μl de etanol anhidro. Se puede formar una pequeña cantidad de precipitación después de agregar el tampón de reactivo C, pero no afecta los experimentos posteriores.)

4. Transferir el líquido obtenido a una columna de purificación de extracción de ADN (casete) (Aproximadamente 650-700 μl cada vez). Déjalo pararse a temperatura ambiente para 2 minutos, centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos recolectados, y vuelva a insertar el tubo de recolección en la columna de purificación para el siguiente paso.
5. Repita el paso 4, Agregar el líquido restante a la columna de purificación de extracción de ADN (casete), centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos y el tubo de recolección.
6. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (casete) en el tubo de recolección, agregar 300 μl de tampón de lavado 1, centrifugar a más 8,000 rpm para 1 minuto, Deseche el líquido de desechos, y colocar la columna de purificación de extracción de ADN. (casete) De vuelta al tubo para el siguiente paso.

(Nota: Confirmar que el etanol anhidro se ha agregado al tampón de lavado 1.)

7. Agregar 500μl de tampón de lavado 1 a la columna de purificación de extracción de ADN (casete), centrifugar en 14,000 rpm (20,000×g) para 2 minutos, Extienda el tiempo de centrifugación adecuadamente para secar la membrana más a fondo.
8. Coloque la columna de purificación de extracción de ADN. (casete) en un nuevo tubo de centrífuga, abrir la tapa, incubar a 65 ℃ para 2 minutos. Extienda este paso si es necesario para evaporar el etanol tanto como sea posible, evitar que los residuos de etanol afecten los experimentos aguas abajo.
9. Sospechoso 50-100μl de tampón de elución sobre la membrana, centrifugar en 12,000 rpm para 2 minutos.

(Nota: 1. Usar 50 μl de tampón de elución para eluir el ADN puede aumentar la concentración de ADN, pero disminuye el rendimiento general de ADN. 2. El ADN eluido se puede volver a aplicar a la columna de purificación de extracción de ADN, centrifugado en 12,000 rpm para 2 minutos de nuevo, para aumentar el rendimiento del ADN.)