Solarbio Malondialdehído (MDA) Kit de ensayo de contenido

malondialdehído (MDA) Kit de ensayo de contenido

Nota: Es necesario predecir 2-3 muestras de gran diferencia antes de la determinación formal. Equipo de operación: espectrofotómetro.

No gato: BC0020

Tamaño: 50T/48S

Componentes:

Componente	Tipo	Volumen/Cantidad	Almacenamiento
reactivo de extracción	Líquido	60 mililitros × 1	4°C
reactivo yo	Líquido	42 mililitros × 1	4°C
Reactivo II	Polvo	–	4°C
Reactivo de trabajo MDA	Líquido	20 ml de reactivo I	4°C
		+ Reactivo II
Reactivo III	Líquido	12 mililitros × 1	4°C

Nota: La solución de trabajo para la detección de MDA es difícil de disolver, que se puede calentar a 70 ℃ y vibrar violentamente para promover la disolución. O mediante tratamiento ultrasónico para promover la disolución..

Descripción del Producto:

• El peróxido lipídico se genera mediante la interacción de radicales libres de oxígeno con ácidos grasos insaturados., eventualmente formando compuestos como el malondialdehído (MDA). El nivel de peroxidación lipídica sirve como indicador., que se puede evaluar midiendo los niveles de MDA.
• En condiciones ácidas y de alta temperatura., un compuesto marrón rojizo, 3,5,5-tres metil sulfametoxazol-2,4-dos cetonas, Se sintetiza mediante una reacción de condensación entre MDA y ácido tiobarbitúrico. (por confirmar). Este compuesto exhibe una absorción máxima a 532 Nuevo Méjico. La evaluación de la peroxidación lipídica implica análisis colorimétricos.. Sin embargo, la presencia de azúcares solubles puede interferir con el proceso de detección. La reacción de azúcares solubles con TBA produce una reacción de color con longitudes de onda de absorción en 450 nm y 532 Nuevo Méjico. En este kit de ensayo, El contenido de MDA está determinado por la variación en la absorbancia en 532 Nuevo Méjico, 450 Nuevo Méjico, y 600 Nuevo Méjico.
• Debido a la presencia de sacarosa en los tejidos vegetales y glucosa en los tejidos animales., el kit incluye dos fórmulas computacionales adaptadas para sacarosa y glucosa. Estas fórmulas son adecuadas para la evaluación de lípidos..

Reactivos y equipos necesarios pero no suministrados:

espectrofotómetro, baño de agua, centrífuga de escritorio, pipeta de transferencia,1 cubeta de vidrio de ml, mortero/homogeneizador, hielo y agua destilada.

Procedimiento:

I. preparación de la muestra:

Bacterias o células:

Recoja bacterias o células en el tubo de centrífuga.. 5 millones de bacterias o células podrían mezclarse con 1 mL de reactivo de extracción. Utilice ultrasonidos para dividir bacterias y células. (colocado sobre hielo, potencia ultrasónica 200W, tiempo ultrasónico 3 segundos, intervalo 10 segundos, repetir para 30 veces). Centrifugar en 8000 ×g para 10 minutos a 4 ℃ para eliminar materiales insolubles, y tomar el sobrenadante en hielo antes de realizar la prueba..

Tejido:

0.1 g de tejido podrían mezclarse con 1 mL de reactivo de extracción y completamente homogeneizado en baño de hielo.. Luego centrifugar a 8000 ×g para 10 minutos a 4 ℃ para eliminar materiales insolubles, y tomar el sobrenadante en hielo antes de realizar la prueba..

Suero:

Detectar

II. Determinación procedimiento:

1. Precaliente el espectrofotómetro durante más de 30 minutos, poner a cero con destilado
2. Agregue reactivos con la siguiente lista:

Reactivo (µL)	Tubo de ensayo (t)	tubo en blanco (B)
Reactivo de trabajo MDA	600	600
Muestra	200	–
Agua destilada	–	200
Reactivo Ⅲ	200	200

La mezcla se incubaría a 100 ℃ durante 60 minutos (bien cerrado para evitar la pérdida de humedad), enfriado en hielo, y centrifugado a 10000 ×g para 10 minutos a temperatura ambiente para eliminar materiales insolubles. Tomar el sobrenadante 1 cubeta de vidrio de ml, y medir la absorbancia en 450 Nuevo Méjico, 532 nm y 600 Nuevo Méjico.

∆A450=A450(t)-A450(B), ∆A532=A532(t)-A532(B), ∆A600 =A600(t)-A600(B). El tubo en blanco debe probarse una o dos veces.

III. Cálculo:

1. Tejido, bacterias o células cultivadas

• Concentración de proteínas:

MDA (protección nmol/mg)=(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×Vrv÷(RCP×Vs)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)÷Cpr

• Peso de la muestra:

MDA (nmol/g de peso)=( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)÷W

• cantidad de celda:

MDA (nmol/104célula)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29×A∆450)×Vrv÷(400×Vs÷Vsv)

=0,01×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)

• Suero:

MDA (nmol/mL)=(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)×Vrv÷Vs

=5×(6.45×(ΔA532 - ΔA600)-1.29×ΔA450)

2. Tejido vegetal:

• Peso de la muestra

MDA (nmol/g de peso)= (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×Vrv÷(W×Vs÷Vsv)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷W

• Concentración de proteínas:

MDA (protección nmol/mg)=( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)×Vrv÷(RCP×Vs)

=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)÷Cpr

Soga: Volumen total de reacción, 1 mililitros; contra: Volumen de la muestra, 0.2 mililitros;

vsv: Volumen de extracción, 1 mililitros;

RCP: Concentración de proteína de muestra, mg/mL; W.: Peso de la muestra, gramo;

400: Número total de bacterias y células., 5 millón.

Nota:

Si se descubre que el valor de absorbancia de la muestra es demasiado bajo, El tiempo del baño de agua hirviendo se puede ajustar desde 60 minutos para 90 minutos o más. La detección de MDA en el mismo experimento debe extenderse al mismo tiempo para evitar errores..

Referencias

• Spitz D.R., Oberley L W. Un ensayo para la actividad de superóxido dismutasa en homogeneizados de tejidos de mamíferos.[j]. Bioquímica analítica,1989
• Masayasu M, Hiroshi Y.. Un método de ensayo simplificado de la actividad de la superóxido dismutasa para uso clínico.[j]. Clínica Química

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