核糖核酸酶h, 或RNase H簡短, 是一種內切核酸酶，具有令人困惑的能力，可以專門水解與DNA雜交的RNA鏈的磷酸二鍵蛋白鍵. 雖然它的活動似乎是自相矛盾的, RNase H通過選擇性靶向RNA-DNA雜交中的RNA部分，在基本細胞過程中起著至關重要的作用. 其特定地點裂解能力的爆發性使其成為分子生物學技術的多功能工具.
在這裡，我們將深入探索RNase H的作用, 它如何工作, NEB重組RNase H產品的關鍵特徵和應用, 並幫助研究人員為他們的需求選擇正確的RNase H酶.
RNase H的功能是什麼?
RNase H的主要功能是裂解RNA-DNA雙鏈體的RNA鏈, 使DNA鏈完好無損. 這種靶向的RNA消化有助於解決在細胞內DNA和RNA交易過程中可能形成的RNA-DNA雜交交叉點. RNase H活性對於各種DNA和RNA代謝過程（例如DNA複製）至關重要, 轉錄, 和Okazaki碎片成熟.
它可以防止RNA底漆在DNA中持續存在並去除雜交與互補DNA模板的RNA轉錄本. 在保護DNA部分的同時，對RNA部分的靶向和分解過程是RNase H在促進體內核酸交易中所起的作用的核心.
RNase H如何工作，其酶活性是什麼?
RNase H通過定位RNA-DNA雜交區域，然後精確地在3之間切割磷酸二酯鍵′-RNA核糖的羥基和鏈中下一個RNA核糖的磷酸組. 它催化酸鹼的水解反應而不干擾DNA鏈的完整性.
在分子水平, RNase H識別RNA-DNA連接並與雙鏈結構強烈結合. 然後，其活性位點將RNA鏈的磷酸二酯鍵夾在3中。′ 到5′ 方向. 這個過程一直持續到整個RNA片段降解而不影響DNA伴侶. 該靶向酶活性稱為RNase H活性，並將其定量為在定義條件下在給定的時期內在RNA-DNA雜交中裂解特定量RNA所需的RNase H量.
NEB RNase H產品的關鍵功能和應用是什麼?
新英格蘭Biolabs或NEB是用於分子生物學應用高質量酶的領先提供商. 它們的重組RNase H是一種精製酶，具有幾個有利特徵. 它與優化的反應緩衝液一起提供，以支持其在較寬的pH和溫度範圍內的活性. 作為重組產品, 它在沒有污染物的批次之間提供一致性.
NEB的RNase H顯示高RNase H功能和特異性, 用RNA-DNA雜交體的Neb RNase H消化RNA鏈，而無需干擾DNA. 它在逆轉錄等技術中具有應用 聚合酶鍊式反應 (逆轉錄聚合酶連鎖反應) 它有助於解決在第一鏈合成過程中通過RNase H活性在第一鏈合成過程中形成的RNA-CDNA雜交的地方. NEB的熱穩定RNase H也可用於更高溫度的核酸應用.
最佳RNase H活性需要什麼條件和緩衝區?
最佳RNase H活性, NEB的重組RNase H需要特定的反應條件和緩衝液組件. 提供的10倍RNase H反應緩衝液包括 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽, KCL, 氯化鎂, 和DTT以保持正確的離子強度和最大酶功能的pH值. RNASE H在PH上效果最好 8.3 和37°C. 在緩衝液中包含Mg2+離子很重要，因為RNase H功能取決於Mg2+的催化活性.
DTT充當還原劑，以保護酶免受氧化的影響. 通過組合RNase H酶來建立反應, 底物RNA-DNA雜交和緩衝液以1倍濃度. 適當的緩衝可增強RNase H穩定性和RNA部分從雜種中的一致切割.
rNase h行動而不是行動，什麼類型的核酸?
儘管RNase H有選擇地靶向RNA-DNA雙鏈體中的RNA, 它不會消化單鏈RNA或DNA. 它也沒有裂開雙鏈DNA. 它的精確酶促RNase H活性特殊用於與DNA鏈雜交的RNA. 該酶有效地識別並降低RNA-DNA異源鏈體的RNA部分，而不會干擾DNA伴侶的完整性和連續性.
RNase H對奇異核酸鍊或缺乏RNA-DNA連接的雙鏈DNA分子幾乎沒有活性. 這種嚴格的底物特異性可從各種核酸交易必不可少的雜化複合物中控制和靶向的RNA去除.
NEB重組RNase H的來源和生產方法是什麼?
NEB的RNase H在大腸桿菌中重組生產，以高純度和批次之間的一致性. 克隆來源是從大腸桿菌中分離出的天然RNase H基因，該基因編碼為E.coli細胞中存在的內源性RNase H. 該基因被插入表達載體，並在非致病性大腸桿菌菌株中擴增. 向量的誘導導致高級重組RNase H蛋白表達.
然後使用柱色譜法純化過表達的RNase H，以獲得高度純化的製劑，沒有污染的核酸酶. 質量控制檢查認證重組酶具有真實的RNase H活性和特異性. 提供最終產品以及針對其功能優化的反應緩衝區.
NEB的RNase H如何用於分子生物學技術（例如RT-PCR）?
RNase H的一個重要應用是在逆轉錄PCR中 (逆轉錄聚合酶連鎖反應) 它有助於解決第一鏈中形成的RNA-CDNA雜種 cDNA合成. 在RT-PCR中, 首先將RNA模板反轉錄為互補DNA (cDNA) 使用DNA底漆. 此過程導致RNA-CDNA雜交雙鏈體. 然後使用NEB的重組RNase H選擇性降解這些雜種的RNA鏈，僅留下單鏈cDNA.
降解原始RNA模板可防止其乾擾隨後的PCR擴增. 通過有效切割RNA, RNase H可以指數放大僅cDNA可以檢測和分析特定的RNA轉錄本. 它在優化條件下降解雜交RNA方面的精度和效率提高了RT-PCR分析的質量和靈敏度.
NEB的RNase H的溫度範圍和熱滅活點是多少?
來自NEB的常規RNase H在25-42°C之間的活性，最大活性在37°C左右. 加熱至65°C時，它會不可逆轉地滅活 20 分分鐘. 對於需要更高溫度的應用, NEB還提供了RNase H的熱穩定變體. 這種耐熱的RNase H在25-80°C之間完全功能性，在高於50-60°C的高溫下活性升高.
即使加熱至80°C，它仍然保持穩定, 使其適用於在較高的熱循環條件下運行的苛刻核酸技術. 熱穩定RNase H可以承受熱滅活步驟和蛋白酶K處理, 提供更大的靈活性. 提供兩個RNASE H版本以及廣泛的產品文檔，以有效使用.
如何從NEB中選擇常規RNase H?
常規RNase H之間的選擇取決於溫度要求和工作流程. 如果可以在42°C以下進行反應，則常規RNase H是一種具有成本效益的選擇, 如標準RT-PCR. 熱穩定RNase H為涉及從50-80°C（如嵌套PCR）升高的熱週期的技術提供了優勢, 逆轉錄環介導的等溫擴增 (RT燈), 和其他熱分析應用. 它的耐熱特性可防止其在多個加熱步驟中的活性損失.
進行高溫核酸分析的研究人員受益於熱穩定RNase H的擴展功能範圍和耐用性. 全面的, NEB的重組RNase H酶為RNA-DNA複合物中的RNA消化提供了可靠的工具.
概括
綜上所述, 這篇博客文章旨在全面解釋什麼是RNASE H是什麼, 它如何專門發揮作用, NEB重組RNase H產品的關鍵屬性, 最佳反應條件, RT-PCR等技術的應用, 和選擇正確的RNase H酶的考慮因素.
通過簡單但詳細的方式深入研究其有趣的酶活性和靶向RNA裂解能力, 我希望這有助於更多地了解多功能RNase H及其在核酸交易中的重要作用. 如果其他任何方面需要更多澄清，請告訴我.
