糞便總RNA萃取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0341	SN0342
RNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
腐殖酸去除試劑I	50毫升	2x50毫升
試劑緩衝液C加	30 毫升	2x30毫升
抑制劑去除緩衝液	30毫升	2x30毫升
溶菌酶	1毫升	2x1毫升
蛋白酶K	1毫升	2x1毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	20 毫升
使用說明書	1	1

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 在乾燥條件下，可以保留 12 月. 溶菌酶和蛋白酶K含有防腐劑, 允許在室溫下運輸. 用於長期儲存, 它應存儲在-20°C下.

3. 試劑盒使用說明

3.1 該試劑盒旨在用於分子生物學研究目的，不應用於疾病診斷或治療.

3.2 套件中的某些成分含有刺激物; 建議採取必要的預防措施 (例如穿著防護衣和護目鏡).

3.3 使用該套件需要額外的設備，例如高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 液態氮, 氯仿, 無菌去離子水, 和EP管.

4. 試劑盒簡介

糞便總RNA純化試劑盒提供了一種快速有效的方法，用於純化糞便和嘔吐物的總RNA, 廣泛適用於革蘭氏陽性細菌的提取, 革蘭氏陰性細菌, 糞便和嘔吐樣品中的病毒RNA.

該套件有效地消除了糞便和嘔吐物中的雜質和抑製劑, 在隨後的下游實驗中減少抑製作用，例如 聚合酶鍊式反應. 提取的RNA可直接用於PCR, 南方印跡, ETC. 整個純化過程不需要苯酚氯仿等有毒試劑, 使RNA純化套件適用於其他各種樣品類型.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前的注意事項:

A. 使用之前, 加入規定量的無水乙醇 洗緩衝 1 如試劑瓶標籤上所示, 並在標籤上進行檢查以表明添加無水乙醇.

乙. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 含有極少量的 EDTA. 如果EDTA可能會影響隨後的實驗, 建議用無菌去離子水代替洗脫緩衝液.

1. 樣品加工 (抑制劑去除):

A: 添加大約200mg的樣品，例如糞便, 加入1毫升去除腐殖酸的試劑I, 徹底渦旋 1-2 分分鐘, 離心機在 12,000 轉速為 2 分分鐘, 並丟棄上清液.

乙: 如果提取的樣品是病毒樣品, 您可以直接進入 2. 如果樣品包含大量抑製劑, 建議先執行抑製劑去除步驟, 儘管它可以降低病毒核酸的產量.

2. 樣品裂解:

A: 用於從細菌樣品中提取核酸, 添加 560μL緩衝液C加, 20μL蛋白酶K, 和20μL溶菌酶 從上一步到離心管. 反轉並徹底混合, 85℃消化 5 分分鐘, 反轉管 6-7 消化過程中的次數.

乙: 用於從病毒樣品中提取核酸, 添加 560μl的緩衝液C Plus和20μl蛋白酶K. 消化為85℃ 5 分分鐘, 反轉管 6-7 消化過程中的次數.

3. 離心機在 12,000 轉速為 5 分分鐘, 將上清液轉移至新的離心管中 (轉移約 500μl 液體).
4. 添加等量的無水乙醇, 充分混合. 可能會發生降水, 但不影響後續實驗.
5. 將所得的液體轉移至RNA純化柱 (每次約650-700μl), 室溫孵育 2 分分鐘, 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入純化管柱進行下一步.
6. 將RNA淨化柱放入新的收集管中, 添加 400µl 抑制劑去除緩衝液, 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘, 丟棄廢棄物, 並將核酸純化柱放回管中以進行下一步.
7. 添加 500µl 洗滌緩衝液 1至RNA純化柱, 離心機在 14,000 轉速 (20,00×g) 為了 2 分分鐘, 根據需要延長離心時間以確保膜乾燥.

(筆記: 乙醇的存在對隨後的實驗有嚴重影響, 因此膜乾燥至關重要. 離心後, 確保在洗脫前不存在乙醇, 然後丟棄廢物和收集管.)

8. 將RNA純化柱放入新的離心管中, 添加 30微升 – 50 µl 洗脫緩衝液到膜, 室溫孵育 5 分分鐘 (15℃-25℃), 離心機超過 8,000 轉速為 1 分分鐘.

(筆記: 使用30μl洗脫緩衝液洗脫RNA可以增加RNA濃度，但可以降低總RNA產量.)

9. 重複上一步.

(筆記: 一個新的離心管可用於收集在第二次洗滌中洗脫的RNA，或繼續使用原始收集管收集RNA.)