Solarbio 組織和血液鹼性磷酸酶 (鹼性磷酸酶/鹼性磷酸酶) 活性測定試劑盒

組織和血液鹼性磷酸酶 (鹼性磷酸酶/鹼性磷酸酶) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計

目錄編號: BC2140

尺寸: 50T/24S

成分:

萃取試劑: 液體 30 mL×1瓶, 4℃保存.

試劑 1: 液體 10 mL×1瓶, 4℃避光保存.

試劑 2: 液體 10 mL×1瓶, 4℃避光保存.

試劑 3: 液體 30 mL×1瓶, 4℃避光保存. 如果變成藍綠色則不能使用.

標準: 液體 1 mL×1瓶, 10 μmol/mL苯酚標準溶液, 4℃保存. 用蒸餾水稀釋至 2.5 使用前μmol/mL.

產品描述:

AKP/ALP 是一種含鋅糖蛋白酶, 在鹼性條件下水解各種天然和合成的磷脂單酯化合物. AKP / ALP廣泛分佈於人體器官, 主要存在於肝臟.

鹼性條件下, AKP/ALP 催化苯磷酸二鈉水解為苯酚, 苯酚與4-氨基安替比林、鐵氰化鉀反應生成紅色醌衍生物, 可以檢測吸光度 510 奈米. AKP/ALP 活性可以透過測量吸光度增加率來計算 510 奈米.

需要但未提供的試劑和設備:

分光光度計, 桌上型離心機, 轉讓者, 1 毫升玻璃比色皿, 冰和蒸餾水.

程式:

我. 酵素 準備:

添加 1 mL 萃取試劑至 0.1 g 組織, 徹底研磨. 4℃離心, 10000 轉速為 10 分分鐘. 取冰上清液待測. 血液樣本可直接檢測. 如果濃度高，用萃取劑稀釋.

二. 決心 程式:

1. 預熱分光光度計 30 分分鐘, 調整波長至 510 奈米, 使用蒸餾將計數器設為零
2. 添加試劑於 1.5 mL 比色皿如下:

試劑名稱 (微升)	試管A3	控制管A4	空管A2	標準管A1
蒸餾水			20
標準溶液				20
上清液	20
試劑 1	200	200	200	200
試劑 2	200	200	200	200
充分混合, 37℃停留 15 分分鐘.
試劑 3	600	600	600	600
上清液		20
充分混合, 檢測吸光度 510 奈米, 記錄為A1, A2, A3, A4.

三、. AKP/ALP 活性計算:

• 蛋白質濃度:

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 37℃每分鐘反應體系中每mg蛋白質的μmol苯酚.

鹼性磷酸酶/鹼性磷酸酶 (U/毫克蛋白質) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(Cpr×Vs)÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷心肺復甦

• 樣品重量:

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 37℃每g樣品每分鐘反應體系中的苯酚μmol.

鹼性磷酸酶/鹼性磷酸酶 (單位/克重量) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷(W÷Ve×Vs)÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)÷W

• 血:

單位定義: 1個酵素活力單位定義為催化產生的酵素的量 1 37℃每mL血清每分鐘反應體系中的μmol苯酚.

鹼性磷酸酶/鹼性磷酸酶 (單位/毫升) =[C×(A3-A4)÷(A1-A2)×Vs]÷Vs÷T=0.167×(A3-A4)÷(A1-A2)

C: 標準濃度, 2.5 微摩爾/毫升;

繩索: 總反應體積, 1020 微升=1.02毫升; VS: 上清液體積, 0.02 毫升;

維: 萃取量, 1 毫升; 瓦: 樣品重量, G;

時間: 反應時間, 15 分分鐘;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升.

筆記:

1. 試劑 1, 試劑 2 和試劑 3 應該受到保護
2. 試劑 3 變為藍綠色後無法使用.
3. 加入試劑後迅速充分混勻 3 以避免不完整

實驗範例:

1. 取小鼠胰臟0.1g，加入 1 mL 勻漿萃取液. 取上清液後, 按確定步驟進行操作. 計算 AT = 0.324, 交流電= 0.037, AB = 0.022, AS= 0.677. 根據樣品質量計算酵素活力: AKP/ALP 酶活性 (U/克質量) = 0.167×(AT-AC)÷(AS-AB) ÷ W =0.167×(0.324-0.037)÷(0.677-0.022)÷0.1=0.732 U/g
2. 服用兔血清後, 請依照確定步驟進行操作, 酵素活力按下式計算: 於= 0.190, 交流電= 0.015, AB = 0.022, AS= 0.677. 根據血液量, 酵素活性計算如下: AKP/ALP 酶活性 (單位/毫升) = 0.167×(AT-AC) ÷ (AS-AB) =0.167×(0.190-0.015)÷(0.677-0.022)=0.0446U/毫升.

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