Solarbio琥珀酸去氫酶 (SDH) 活性測定試劑盒

琥珀酸脫氫酶 (SDH) 活性測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

檢測設備: 分光光度計

目錄號: BC0950

尺寸: 50T/48S

成分

試劑一: 60 毫升×1, 存儲在-20℃. 試劑二: 0.6 毫升×1, 存儲在-20℃. 試劑三: 5 毫升×1, 4℃保存.

試劑四: 粉末×1, 4℃保存. 何時使用解決方案, 將其添加到試劑III中以溶解用於使用.

試劑V: 粉末×1, 4℃保存. 添加 4 當使用溶液時，蒸餾水的毫升, 未使用的試劑存儲在4℃.

試劑六: 粉末×1, 存儲在-20℃. 添加 3.333 當使用溶液時，蒸餾水的毫升, 未使用的試劑存儲在4℃.

描述

琥珀酸脫氫酶 (SDH, 歐共體 1.3.5.1) 廣泛存在於動物體內, 植物, 微生物和培養細胞. SDH是線粒體的標記酶, 這是位於線粒體內膜的膜結合酶. 它也是呼吸電子轉移和氧化磷酸化的關鍵點之一. 另外, 它為各種核細胞的呼吸鏈提供電子.

SDH可以催化琥珀酸脫氫對富馬酸的脫氫作用. 脫氫可以減少2,6-二氯苯酚indophenol (DCPIP) 在苯嗪二甲基硫酸鹽的轉移下 (PMS). 2,6- DCPIP在 600 奈米. 2,6-DCIP的降低率取決於吸光度的變化 600 奈米, 代表SDH酶的活性.

需要但未提供

分光光度計, 水浴, 桌面離心機, 可調式移液器, 研缽/均質器, 1 毫升玻璃比色皿, 冰和蒸餾水.

協定

我. 提取SDH:

準確稱重 0.1 g組織或收集 5 百萬個細胞, 添加 1 試劑I和 10 µL 試劑 II, 通過在冰浴中使用勻漿器/砂漿來勻漿, 完全研磨, 離心機在 11000 ×g 為 10 4℃ 分鐘, 取上清液置於冰上進行測試.

二. 程式

1. 預熱分光光度計 30 分分鐘, 調整波長至 600 nm 並用蒸餾水調零.
2. 程序測試

試劑名稱 (微升)	試管 (時間)	黑管 (乙)
試劑三	60	60
試劑V	60	60
蒸餾水	800	800
保持25℃的溫暖(一般物種) 或37℃(哺乳動物) 水浴用於 10 分分鐘.
樣本	30	–
蒸餾水	–	30
試劑六	30	30

將每個試劑添加到 1 ML玻璃比色杯依次, 並在添加試劑VI的同時開始計時, 記錄初始吸光度A1的波長 600 奈米對於 20 秒. 然後將比色杯與反應溶液一起放入37℃的水浴中 (哺乳動物) 或25℃ (其他物種), 和準確的反應 1 分分鐘. 迅速取出比色杯並乾燥, 並記錄吸光度A2 80 幾秒鐘 600 奈米. ΔA= A1-A2, 獲得ΔAT, ΔAB.

三、. SDH的計算 活動

確定的計算公式 1 毫升玻璃比色皿.

• 蛋白質濃度

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化所消耗的酶 1 在反應系統中，每分鐘每分鐘2,6-二氯苯酚的NMOL每個毫克組織蛋白.

SDH(U/毫克蛋白質)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε×d)×VRV×109]÷(心肺復甦×VS) ÷t ＝1555.556×(ΔAT-ΔAB)÷心肺復甦

• 樣品重量

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化所消耗的酶 1 在反應系統中，每分鐘每分鐘2,6-二氯苯酚的NMOL每個克組織.

SDH(u/g)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε×d)×VRV×109]÷(VS÷VST×W) ÷t ＝1571.111×(ΔAT-ΔAB)÷W

• 細菌或細胞

單位定義: 一個酶活性的單位定義為酶的量催化所消耗的酶 1 每個反應系統中每分鐘2,6-氯苯酚indophenol的NMOL每個 10 千菌或細胞.

SDH(U/104細胞)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε×d)×VRV×109]÷(VS÷VST×500) ÷T

＝3.142×(ΔAT-ΔAB)

虛擬實境測試: 總反應體積, 0.98×10-3 L;

e: 2,6-DCPIP的摩爾滅絕係數, 2.1×104 l/mol/cm; d: 比色板的光直徑, 1 公分;

VS: 樣品量, 0.03 毫升;

變速: 添加試劑I和試劑II的體積, 1.01 毫升; 時間: 反應時間(分分鐘), 1 分分鐘;

心肺復甦: 樣品蛋白濃度, 毫克/毫升; 瓦: 樣品重量, G;

500: 細胞或細菌, 5 百萬.

筆記

1. 在決心期間，所有試劑和样品均應放在冰上，以避免變性和停用.
2. 如果ΔA大於 0.5, 應用酶提取物稀釋酶溶液，以少於 0.5, 可以提高檢測靈敏度.
3. 因為提取溶液含有一定的蛋白質濃度 (關於 1 毫克/毫升), 確定樣品的蛋白質濃度時，必須減去提取溶液本身的蛋白質含​​量.

實驗範例:

1. 服用0.1克腎臟, 添加 1 試劑的mL 10 μL試劑ⅱ, 用冰浴研磨勻漿, 離心為4℃和11000克 10 分分鐘, 並將上清液放在冰上. 根據確定程序, 酵素活性計算如下: ΔAT= A1T- A2T = 0.82-0.681 = 0.139, ΔAB= A1b- A2B = 905-0.904 = 0.001

SDH活動 (U/克質量) = 961.905×(ΔAT- ΔAB) ÷w = 2168.13 u/g質量.

參考

• 委託書p, Bertoni-foldari c, 盒子你, 等人. 大鼠浦肯野細胞線粒體的琥珀酸脫氫酶活性受損[J]. 衰老機制, 1998, 101(1-2): 175- 182.

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