Solarbio 土壤基因組 DNA 萃取試劑盒

套件內容

筆記: 一旦打開, 方案A, 乙, C, D 應保存在2-8℃. PCR增強劑應保存在-20℃.

產品描述

• 適用性和有效性:
  • 土壤 基因組DNA萃取 該套件非常適合從肉桂土等極端土壤環境中提取微生物 DNA, 泥, 火山灰, ETC.
  • 它有效地溶解細菌和真菌, 保護微生物 DNA 多樣性.
• 腐殖質去除:
  • 利用獨特的腐殖質吸附材料，高效、專一地去除各種腐殖質成分.
  • 此過程不會影響產量, 與苯酚-氯仿提取法相比，純度顯著提高.
• DNA 產量和完整性:
  • 提取的 DNA 產量非常可觀, 且完整性得到良好維護.
  • 提取的DNA適用於各種常規操作, 包括酶消化, 聚合酶鍊式反應, 圖書館建設, 南部印跡, ETC.

協定

使用前在洗滌緩衝液中加入新鮮打開的無水乙醇, 體積以瓶子標籤為參考. 將瓶蓋放回瓶子上並搖勻. 所有離心步驟均在室溫下進行 (15℃-25℃).

1. 方法A: 稱取土樣0.1-0.5g, 將土加入砂漿中, 倒入適量液氮, 立即研磨, 並重複三遍. 當土變成粉末時, 添加450ul溶液A, 繼續搖動1-2min，直至溶質完全懸浮.

方法B: 稱取土樣0.1-0.5g於離心管中 (最好用2ml圓底的), 添加450ul溶液A, 繼續搖動1-2min直至溶質完全懸浮. 筆記: 用液氮研磨效果會更好.

2. 添加50ul溶液B, 並翻轉試管數次以充分混合 (不要劇烈搖晃). 65℃水浴孵育 6 分分鐘, 倒置, 並混合每個 2 分分鐘.
3. 添加100ul溶液C, 並翻轉試管數次以充分混合 (不要劇烈搖晃). 離心機在, 12000轉速為 10 分分鐘.
4. 將上清液轉移至新的離心管中, 離心機在, 12000轉速為 10 分分鐘.
5. 向吸附柱中加入200ul溶液D, 添加步驟離心的上清液 4 至吸附柱, 用移液器充分混合. 12000rpm 離心 1 分分鐘.
6. 濾液在收集管中充分混合, 添加至吸附柱, 並以 12000rpm 離心 1 分分鐘.
7. 清除收集管中的廢液, 吸附柱中加入500ul洗滌緩衝液, 並以 12000rpm 離心 10 分分鐘.
8. 重複步驟 7 兩次 (總共洗三遍).
9. 清除收集管中的廢液, 將吸附柱放回收集管中, 並以 12000rpm 離心 2 分分鐘.
10. 室溫乾燥吸附柱(15℃-25℃) 幾分鐘或50℃ 1 分分鐘.
11. 將吸附柱放入新的離心管中, 添加50-100ul洗滌緩衝液 (使用前預熱65℃), 並以 12000rpm 離心 1 分分鐘.
12. 將離心管中的濾液加入吸附柱, 12000rpm 離心機 1 分分鐘. 離心管內液體為土壤基因組DNA提取液.
13. 如果DNA的PCR效果不好, 適當稀釋 DNA 濃度或添加 1/10 PCR增強子體積.

筆記

1. 新鮮的土壤樣品將獲得更高的產量. 並且最好參考不同樣品的適當保存條件.
2. 如果溶液出現沉澱, 37℃水浴再溶解片刻, 降水將會消失, 且不影響DNA提取.
3. 取上清液時, 應避免採取降水措施, 否則, 會堵塞吸收塔，影響產品純度.
4. 洗脫緩衝液體積不應小於50ul, 如果體積太小, 會影響回收率 建議使用試劑盒附帶的Elution buffer, 使用水作為洗脫緩衝液會丟失部分 DNA. 提取的DNA應-20℃保存，避免反复凍融循環，防止DNA降解.
5. 如果產品含有殘留腐殖質, 會嚴重影響DNA吸光度, 因此應採用電泳檢測和分光光度計相結合的方式進行鑑定
6. 避免接觸液體試劑, 如果意外接觸, 立即用大量水沖洗.

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