筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.
操作設備: 分光光度計
目錄號: BC0440
尺寸:50T/48S
成分:
- 核糖1,5-雙磷酸羧化酶/氧酶 (盧比斯科) 是植物光合作用的關鍵酶.
- 它控制二氧化碳固定並調節碳流入加爾文週期和光震動週期.
- Rubisco的活動直接影響光合率.
- Rubisco催化核糖1,5-磷酸鹽的組合 (摩擦) 和二氧化碳生產3-磷酸甘油酯 (PGA).
- PGA進一步轉化為3-磷酸甘油醛, 伴隨著NADH氧化形成NAD+.
- NADH吸收光 340 奈米, 而nad+沒有.
- 在這個套件中, Rubisco活動是通過測量NADH吸光度下降來確定的 340 奈米.
需要但未提供的試劑和設備:
紫外分光光度計, 桌上型離心機, 可調式移液器, 水浴, 1 ML石英比色卷, 研缽/均質器, 冰, 蒸餾水.
程式:
樣品製備:
-
- 細菌或細胞:
- 將細菌或細胞收集到離心管中並離心以丟棄上清液.
- 添加 1 ml提取溶液 5 百萬細菌或細胞.
- 使用超聲處理 (在冰上, 20% 力量, 3 幾秒鐘, 10 幾秒鐘, 重複 30 次) 裂解細菌或細胞.
- 離心機在 10000 ×g 為 10 4°C的分鐘分鐘以去除不溶性材料並在冰上收集上清液進行測試.
- 組織:
- 添加 1 ml提取溶液 0.1 克組織 (最好是新鮮的植物樣品) 並在冰上勻漿.
- 離心機在 10000 ×g 為 10 4°C的分鐘以去除不溶材料, 並在冰上收集上清液進行測試.
- 細菌或細胞:
確定程序:
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- 預熱紫外分光光度計 30 分鐘並將波長調整為 340 奈米. 用蒸餾水使樂器零.
- 添加以下試劑:
-
-
試劑 (微升) | 試管 (時間) | 空白管 (乙) |
樣本 | 100 | – |
蒸餾水 | – | 100 |
試劑三 | 35 | 35 |
試劑四 | 35 | 35 |
工作溶液 | 900 | 900 |
檢測吸光度 340 NM 20年代和5分之20, 分別記錄為A1和A2. ΔA(時間)= A2(時間)-A1(時間), ΔA(乙)= A2(乙)-A1(乙), ΔA=ΔA(時間)-ΔA(乙). 在反應期間保持25℃. 空白管只需要測試一次或兩次.
計算:
實驗範例:
取0.1克植物葉, 添加 1 ML提取溶液的均質化溶液, 取上清液, 然後按照確定步驟進行操作.
用微石英比色綠色測量併計算
ΔAT= AT1-AT2 = 1.279-1.206 = 0.073, ΔAB= AB1 – AB2 = 0.834-0.823 = 0.011,
ΔA=ΔAT-ΔAB= 0.073-0.011 = 0.062
Rubisco活動 (U/克質量) = 344 ×ΔA÷w = 344×0.062÷0.1 = 213.28 u/g質量.
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