Solarbio還原型穀胱甘肽 (還原型穀胱甘肽) 含量測定試劑盒

還原型穀胱甘肽 (還原型穀胱甘肽) 含量測定試劑盒

筆記: 測試前取兩個或三個不同的樣本進行預測.

操作設備: 分光光度計/酶標儀

目錄編號: BC1175

尺寸: 100T/96S

成分:

試劑一: 100 毫升×1. 4℃保存.

試劑二: 20 毫升×1. 4℃保存.

試劑三: 8 毫升×1. 4℃保存, 避光.

標準: 粉末 10 毫克×1. 4℃保存, 避光.

產品描述

穀胱甘肽是由麩胺酸組成的天然三肽 (麩胺酸), 半胱胺酸 (半胱胺酸) 和甘氨酸 (甘胺酸). 它是一種含有巰基的化合物 (-SH), 廣泛存在於動物組織中, 植物組織, 微生物, 和酵母. 穀胱甘肽可與5,5反應′-二硫雙-(2-硝基苯甲酸) (DTNB) 生產2-硝基-5-巰基苯甲酸和穀胱甘肽二硫化物 (GSSG). 2-硝基-5-巰基苯甲酸是黃色產品, 最大吸收在 412 奈米.

技術規格

最低檢測極限：3.763 微克/毫升

線性範圍：12.5-400 微克/毫升

需要但未提供的試劑和設備

分析天平, 研缽/均質器, 低溫離心機, 水浴, 可調式移液器, 分光光度計/酶標儀, 微型玻璃比色皿或 96 井平底板和蒸餾水.

程式

我. 樣品製備

1. 組織樣本

新鮮組織用PBS清洗兩次, 然後加 0.1 g 動物/植物組織放入均質機 (均質器在使用前已用試劑 I 沖洗並置於冰上). 添加 1 試劑 I 的毫升數 (組織和試劑的比例可以保持恆定), 在冰上充分研磨 (使用液態氮會有更好的研磨效果). 離心機在 8000 ×g 為 10 4℃ 分鐘, 取上清液置於4℃待測. (如果暫時無法完成測試, 上清液可在-80℃保存 10 天。)

2. 血液樣本

電漿: 樣品在以下溫度下離心 600 ×g 為 10 4℃ 分鐘. 將上層血漿吸至另一管中，加入相同體積的試劑I. 離心機在 8000 ×g 為 10 4℃ 分鐘, 取上清液置於4℃待測. (如果暫時無法完成測試, 上清液可在-80℃保存 10 天。)

血球: 樣品在以下溫度下離心 600 ×g 為 10 4℃ 分鐘. 丟棄上層血漿, 用三倍體積的PBS清洗 3 次 (用 PBS 重懸血細胞, 離心機在 600 ×g 為 10 分分鐘), 加入等體積的試劑 I. 混合後, 放置在4℃下 10 分分鐘. 離心機在 8000 ×g 為 10 分分鐘, 取上清液置於4℃待測. (如果暫時無法完成測試, 上清液可在-80℃保存 10 天。)

3. 細胞 樣本

收穫細胞不少於106個，然後用PBS清洗兩次 (用 PBS 重懸細胞, 離心機在 600 ×g 為 10 分分鐘). 加入的試劑I體積是細胞沉澱體積的三倍，以重懸細胞. 反覆凍融2-3次 (建議液態氮冷凍, 37℃水浴溶解). 離心機在 8000 ×g 為 10 分分鐘, 取上清液置於4℃待測. (如果暫時無法完成測試, 上清液可在-80℃保存 10 天。)

二. 程式

1. 預熱分光光度計/酵素標儀 30 分分鐘, 調整波長至 412 奈米, 用蒸餾器調零
2. 37℃預熱試劑II (哺乳動物細胞) 或25℃ (其他物種) 水浴用於 30
3. 空白管測定: 取微型玻璃比色皿, 添加 20 µL 蒸餾水, 140 µL 試劑 II, 40 依序μL試劑III, 攪拌均勻, 的地方 2 分分鐘, 並測量 412 奈米吸光度AB.
4. 製作標準曲線

稱重 1 mg 標準品並用 1 毫升蒸餾水以獲得濃度 1 毫克/毫升. 取適當溶液配製標準品，濃度為 200 微克/毫升, 100 微克/毫升, 50 微克/毫升, 25 微克/毫升和 12.5 微克/毫升 (稀釋標準溶液前先將試劑 I 稀釋十倍).

採取一個 1.5 mL EP 管並加入 20 µL 標準品, 140 µL 試劑 II 和 40 依序μL試劑III. 各管混合均勻後, 它可以代表 2 分分鐘. 測量吸光度 412 奈米, 以吸光度減去AB為橫座標. 根據吸光度繪製標準曲線 (X) 和濃度 (y, 微克/毫升).

5. 樣品管測試: 取微型玻璃比色皿, 添加 20 µL 樣品, 140 µL 試劑 II, 40 依序μL試劑III, 攪拌均勻, 然後代表 2 分鐘測試吸光度 ATat 412 奈米, ΔA=AT – AB.
6. 酶標儀的操作與分光光度計相同, 而且操作速度一樣快

三、. 計算

根據標準曲線, 將樣本ΔA帶入公式(X), 並計算樣品濃度y (微克/毫升).

• 蛋白質濃度

還原型穀胱甘肽 (微克/毫克蛋白質)=y×VRV÷VRV÷Cpr =y÷Cpr

• 樣品重量

還原型穀胱甘肽 (微克/克)=y×VRV÷(VRV÷VSV×W)= y÷W

• 細胞數量

還原型穀胱甘肽 (微克/104細胞)=y×VRV÷(VRV÷VSV×N)= y÷N

• 溶液體積 GSH (微克/毫升)=2年

氮: 細胞數量, 106;

VSV: 上清液總量, 1 毫升；

繩子: 添加到反應系統中的上清液體積, 20 微升=0.02毫升； 瓦: 樣品重量, G;

心肺復甦: 上清液蛋白濃度, 毫克/毫升.

2: 血漿體積 (血球) 被稀釋一倍.

筆記:

1. 樣品需要完全均質. 如果暫時無法完成測試, 可在-80℃保存.
2. 標準: 當溶液如下時，製備還原型穀胱甘肽
3. 如果樣品中的 GSH 含量不確定, 之前將樣品稀釋幾個梯度
4. 因為試劑I含有蛋白沉澱, 上清液不能用於蛋白質濃度測定. 如果需要測定蛋白質含量, 拿另一張紙巾.

參考:

• 阿爾珀特J, 吉爾伯特·H·F. 透過回收柱後反應檢測氧化型和還原型穀胱甘肽[J]. 分析生物化學, 1985, 144(2):553-562.
• 歐文斯 C W I, 貝爾徹房車. 比色微量法測定穀胱甘肽[J]. 生化雜誌, 1965, 94(3):

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