| 屬性 | 細節 |
|---|---|
| 貓號碼 | SN0020 |
| 尺寸 | 50T/100T |
| 貯存 | 存儲在 4 °C短儲存. 用於更長的存儲空間, 該套件可以存放在 -20 °C或 -80 ℃. |
套件組件
| 成分 | 50時間 | 100時間 |
| 裂解緩衝液 | 100毫升 | 200毫升 |
| 試劑A | 2.5毫升 | 5毫升 |
| 中型緩衝區 | 25毫升 | 50毫升 |
| 商店緩衝區 | 5毫升 | 10毫升 |
產品描述
- 從動物細胞和組織中分離出純核 (柔軟的: 肝臟/大腦, 難的: 肌肉, 培養)
- 應用領域: 細胞死亡 (凋亡), 訊號, 代謝 & 蛋白質研究
- 不含蛋白質的細胞核 & 核酸酶污染
協定
樣品製備:
- 紙巾:
- 服用100-200mg新鮮組織 (肝, 腦, 心)
- 用PBS/鹽水清洗, 乾燥, 切成小塊
- 用1ML預冷的LY10IS緩衝液均質化 & 50µL試劑a (冰浴, 20X)
- 培養的細胞:
- 消化和清洗細胞
- 離心機 (5-10分分鐘, 800G), 棄去上清液, 收集 & 計數細胞
- 重懸於5×101ML預冷裂解緩衝液中的 ^7個細胞
- 加入50µL試劑A, 勻漿 (冰浴, 20-30X)
核隔離:
- 將勻漿轉移到1.5ml離心管.
- 離心機 (5分分鐘, 700G, 4℃), 棄去上清液 (核顆粒仍然存在).
- 重懸於0.5毫升預冷裂解緩衝液的核彈.
- 轉移到包含0.5毫升介質緩衝液的新管 (小心地分層).
- 離心機 (5分分鐘, 700G, 4℃), 棄去上清液 (核顆粒仍然存在).
- 重懸於5ML中型緩衝液的核彈.
- 離心機 (10分分鐘, 1000G, 4℃), 棄去上清液 (純化的核顆粒).
貯存:
- 重懸於50-100μl商店緩衝液或所需緩衝液中的純化核.
- 核可以使用或可以存儲在-70°C下
筆記:
確保完整的核:
- 低溫: 在低溫下執行整個過程.
- 速度: 在整個過程中快速工作.
- 細胞破壞: 關鍵是打破細胞而不會損壞細胞器.
- 紙巾: 使用帶有緊身杵的小容量玻璃均勻均勻的均勻均勻的均勻均勻均勻化.
- 培養的細胞: 破壞粘附細胞更具挑戰性. 利用小型均質器和緊密的杵以獲得最佳效果.
離心:
- 計算正確的離心速度 (RPM) 基於所需的相對離心力 (RCF或G-Force) 使用公式:
- g = 1.11 x 10^-5 x r x (RPM)^2
- G: RCF (G)
- RPM: 每分鐘旋轉 (平方)
- r: 轉子半徑 (公分)
下游應用程序:
-
- 用於Western blot和2d頁, 通過添加加載緩衝液直接裂解核樣品.
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