Solarbio Mouse CK-MB1 ELISA套件48T

產品概述

本試劑盒用於定量檢測小鼠血清中CK-MB1濃度, 電漿, 或僅用於研究目的的細胞培養上清液樣品, 不用於臨床診斷.

背景:

CK-MB 同工酶存在兩種同工型: CK-MB1 和 CK-MB2. CK-MB 的實驗室測定代表同工酶 CK-MB1 和 CK-MB2 的簡單總和. CK-MB2是心肌梗死後最初從心肌釋放的組織形式 (心肌梗死). 症狀出現後, 它在血清中迅速轉化為 CK-MB1 亞型. 正常情況下, 組織中 CK-MB1 同工酶占主導地位. 所以, CK-MB2 與 CK-MB1 的比率通常小於 1. CK-MB2可在血清中檢測到 2-4 發病後數小時和峰值 6-9 小時, 使其成為急性心肌梗死的早期標誌物. 兩項評估其使用的大型研究顯示敏感性 92% 在 6 發病後數小時, 相比 66% 對於 CK-MB 和 79% 對於肌紅蛋白.

檢測原理:

這 索拉生物 (索拉生物®) 酶聯免疫吸附測定試劑盒 採用基於夾心雙抗體法的酶聯免疫吸附測定技術. 酶標板上包被有針對小鼠 CK-MB1 的單克隆抗體. 標準樣品和預稀釋樣品分別添加. 標準樣品和样品中的小鼠CK-MB1將與板上的包被抗體完全結合. 洗完後, 添加生物素化抗小鼠 CK-MB1 抗體, 它將與板上包被抗體捕獲的小鼠 CK-MB1 特異性結合. 洗完後, 辣根過氧化物酶 (辣根過氧化物酶)-添加標記的鏈黴親和素, 生物素將與鏈黴親和素進行高強度非共價結合. 洗完後, 添加TMB底物顯色. 如果反應孔中存在不同濃度的小鼠CK-MB1, HRP會將無色的TMB變成深淺不一的藍色物質 (正相關). 添加終止液後, 反應孔會變黃. 最後, 吸光度 (的) 反應孔樣品的測量在 λmax=450 nm (OD=450nm). 樣品中小鼠CK-MB1的濃度與OD成正比. 通過繪製標準曲線並使用四參數擬合軟件可以計算出樣品中小鼠CK-MB1的濃度.

預防措施:

1. 試劑盒中的終止液為酸性溶液. 操作人員使用時應戴手套並做好防護措施. 操作過程中避免皮膚、眼睛接觸所有試劑. 萬一不小心接觸到, 用大量水沖洗. 檢測血液樣本和其他體液樣本時, 請遵守國家生物實驗室相關管理規定進行安全防護.
2. 當套件不使用時, 在保質期內將其存放在2-8°C的冰箱中. 丟棄任何剩餘的重構但未使用的標準溶液或根據需要等分, 並將它們存放在冰箱中 -20 至-80°C.
3. 讓套件平衡至室溫 30 使用前分鐘, 並徹底混合試劑盒中的所有成分和製備的樣品.
4. 套件不能一次性用完. 回到室溫後, 取出所需的酶板條, 用密封膠帶蓋住剩餘的部分, 然後將它們放回密封袋中.
5. 建議實驗過程中對標準樣品和样品進行重複孔測試, 且添加試劑的順序要一致. 確保結果準確, 每次測試都必須繪製標準曲線.
6. 避免交叉污染, 使用一次性EP管, 移液器吸頭, 密封膠帶 (※), 並在實驗中清潔塑料容器.
7. 濃縮酶標抗體的體積, 濃縮生物素化抗體, 濃縮酶結合物很小. 運輸過程中, 微量液體可能粘附在管壁和瓶蓋上. 使用前, 離心機 (5-10 秒) 收集管底部的液體, 取出時小心移液.
8. 請勿使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑.

技術要點:

1. 重新配製或混合標準溶液時, 輕輕混合以避免形成氣泡.
2. 充分混合對於反應結果尤為重要. 最好使用微孔板混合器 (低頻率混合).
3. 使用自動洗板機時, 設置浸泡程序 10-30 添加清洗液後幾秒鐘, 或反轉微孔板 180 不同洗滌步驟的程度，提高洗滌效率.
4. 確保結果的準確性, 孵育過程中用密封膠帶密封酶板條.
5. 添加前底物應為無色, 並始終避光保存.
6. 添加終止液的順序應與添加底物的順序相同.
7. 添加終止液後, 基材的顏色應從藍色變為黃色. 如果基材呈綠色, 表明終止液和底物混合不充分.
8. 需要對樣品進行預實驗測試. 根據實驗設計進行適當的樣品稀釋，確保樣品值落在試劑盒標準曲線範圍內.
9. 在任何情況下都避免接觸微孔板的內表面和外表面.

實驗室設備:

1. 酶標儀 (主波長 450 奈米, 參考波長 630 奈米)
2. 高精度移液器和一次性吸頭: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000 微升
3. 洗板機或洗瓶
4. 雙蒸水或去離子水
5. EP管, 量筒, 吸水紙
6. 37°C培養箱

樣品採集和儲存:

• 血清樣本: 讓室溫下的血液自然凝固 30 分分鐘, 然後以 1000×g 離心 15 4°C 分鐘. 將上清液等體積轉移至小 EP 管中並儲存於 -20°C 以下 (樣品可在 2-8°C 下保存長達 24 測試前幾小時; 如果儲存過程中出現沉澱, 再次離心以避免重複凍融循環).
• 血漿樣本: 將全血收集到含有抗凝劑的試管中, 如乙二胺四乙酸, 檸檬酸鈉, 或肝素, 根據試樣的具體要求. 混合用於 20 分分鐘, 然後以 1000×g 離心 15 4°C 分鐘. 將上清液等體積轉移至小 EP 管中並儲存於 -20°C 以下 (樣品可在 2-8°C 下保存長達 24 測試前數小時以避免重複凍融循環).
• 細胞培養上清液: 將細胞培養基轉移至無菌離心管中並在 1000 ×g 為 10 4°C 分鐘. 將上清液等體積轉移至小 EP 管中並儲存於 -20°C 以下 (樣品可在 2-8°C 下保存長達 24 測試前數小時以避免重複凍融循環).
• 組織勻漿: 用預冷的 PBS 沖洗組織 (0.01中號, pH=7.4) 去除殘留的血液, 然後稱重並切碎組織. 將切碎的組織放入裝有相應體積 PBS 的玻璃勻漿器中 (一般重量體積比為 1:9, 例如 1 g 組織樣本對應於 9 PBS 毫升; 根據實驗需要調節音量並記錄).

建議在 PBS 中添加蛋白酶抑製劑. 在冰上徹底研磨組織. 用於進一步組織細胞裂解, 勻漿可以反复凍融循環或超聲波破碎. 最後, 2-8°C 離心勻漿, 5000×g 為 5-10 分分鐘, 並收集上清液進行檢測.

※ 特別說明:

1. 該試劑盒可能適用於其他生物樣品, 但需要實驗驗證.
2. 測試前必須除去樣品中可見的沉澱物.
3. 血清、血漿樣本避免使用溶血或高脂血症樣本，以免影響檢測結果.
4. 如果樣品中目標分析物的檢測濃度超過標準的最高值, 測試前樣品應適當稀釋. 正式實驗前必須進行預實驗確定稀釋倍數.

試劑製備:

1. 試劑平衡: 將試劑盒和待測樣品置於室溫下 30 實驗前幾分鐘. 如果濃縮的洗滌液結晶, 將其置於37°C水浴中直至所有晶體溶解.
2. 洗滌液的製備: 提前計算出所需稀釋洗液的體積. 用雙蒸水或去離子水稀釋20×濃縮洗滌液，得到1×工作液. 將所有未使用的濃縮洗滌液儲存在 4°C 的冰箱中.
3. 標準溶液的梯度稀釋: 開封前, 確保所有凍乾標準物質均位於容器底部. 添加 0.733 SR1 標準品/樣品稀釋液 mL (2A) 至凍乾標準物質 (專注: 80000 pg/ml). 讓它代表 10-30 分鐘直至完全溶解, 溶解後輕輕混勻. 按下列濃度進行2倍稀釋: 80000, 40000, 20000, 10000, 5000, 2500, 和 1250 pg/ml. 濃度為 80000 pg/mL 是標準曲線上的最高點, 和 SR1 標準品/樣品稀釋劑 (2A) 作為 0 出色地 (0 pg/ml) 標準曲線的. 任何未使用的重構標準儲備溶液 (80000 pg/ml) 應根據需要丟棄或分裝並存放在冰箱中 -20 至-80°C.

檢測步驟:

測試前, 將所有試劑和样品平衡至室溫.

1. 準備工作濃度所需的所有試劑和標準溶液.
2. 設置標準井, 零井, 和样品井. 計算當前實驗所需的條數, 去除不必要的條帶, 用新的密封膜重新密封它們, 並將它們放回裝有乾燥劑的鋁箔袋中.
3. 浸泡酶板: 添加 300 μL 1×洗滌液，浸泡 30 秒. 丟棄洗滌液並將微孔板放在吸水紙上拍幹. 重複此步驟兩次. 筆記: 洗完後, 立即使用微孔板，不要讓它乾燥.
4. 添加標準溶液: 添加 100 將2倍稀釋的標準溶液μL加入標準孔中. 添加 100 µL 標準品/樣品稀釋液至零孔.
5. 添加樣品: 添加 100 µL 測試樣品至樣品孔. 確保分步連續添加樣品 4 和 5 不間斷. 內完成樣品添加過程 10 分分鐘.
6. 孵: 用新的密封膜密封板. 室溫孵育 (25±2℃) 與搖動 120 分分鐘.
7. 洗: 丟棄液體, 添加 300 每孔加入 μL 洗滌液, 並洗四次. 每次清洗後將微孔板放在吸水紙上拍幹. 以獲得理想的實驗結果, 必須徹底清除殘留液體. 筆記: 洗完後, 立即進行下一步，不要讓微孔板變乾.
8. 添加生物素化檢測抗體: 添加 100 每孔加入 μL 生物素化抗體工作液.
9. 孵: 用新的密封膜密封板. 室溫孵育 (25±2℃) 與搖動 60 分分鐘.
10. 洗: 丟棄液體, 添加 300 每孔加入 μL 洗滌液, 並洗四次. 每次清洗後將微孔板放在吸水紙上拍幹. 筆記: 以獲得理想的實驗結果, 必須徹底清除殘留液體. 洗完後, 立即進行下一步，不要讓微孔板變乾.
11. 添加酶結合物: 添加 100 每孔加入酶標工作液 μL.
12. 孵: 用新的密封膜密封板. 室溫孵育 (25±2℃) 與搖動 30 分分鐘.
13. 洗: 丟棄液體, 添加 300 每孔加入 μL 洗滌液, 並清洗五次. 每次清洗後將微孔板放在吸水紙上拍幹. 筆記: 以獲得理想的實驗結果, 必須徹底清除殘留液體. 洗完後, 立即進行下一步，不要讓微孔板變乾.
14. 添加底物進行顯色: 添加 100 每孔加入 μL TMB 底物, 避免光線照射, 並在室溫下孵育 (25±2℃) 用於顯色 5-30 分分鐘. 筆記: 顯色時間可根據實際顯色情況調整, 但不應超過 30 分分鐘. 當標準孔中出現明顯的顏色梯度時終止反應 (第一個是清晰的藍色漸變 4 標準井的井, 與下一個 3-4 孔沒有顯示明顯的梯度). 預熱酶標儀 15 提前幾分鐘.
15. 添加終止液: 添加 50 每孔加入終止液 μL. 嘗試按照與底物添加相同的順序添加終止溶液. 筆記: 添加終止液後，微孔板孔內液體顏色由藍色變為黃色. 如果顏色呈綠色或顏色變化不均勻, 輕輕敲擊盤框使其水平混合.
16. 讀取測量值: 之內 5 分分鐘, 使用酶標儀進行雙波長檢測，測量最大吸光波長處的 OD 值 450 nm 和參考波長 630 奈米. 筆記: 校准後的 OD 值是在 450 nm 減去測量值 630 奈米. (筆記: OD值在 630 nm為微孔板材料的吸光度值. 如果無法進行雙波長檢測, 僅測量 OD 值 450 納米波長, 但數據的準確性會略有降低。)