建設局 (二辛可寧酸) 蛋白質檢測試劑盒是一種廣泛使用的比色方法,用於定量樣本中的蛋白質濃度. 此測定依賴於鹼性條件下蛋白質將 Cu^2+ 離子還原為 Cu^1+, 與二辛可寧酸形成紫色絡合物. 顏色的深淺與蛋白質濃度成正比, 實現準確量化.
這是有關如何使用的分步指南 BCA蛋白 檢測試劑盒:
所需材料:
- BCA 蛋白檢測試劑盒
- 蛋白質標準品 (常用的是牛血清白蛋白)
- 含有未知蛋白質濃度的樣品
- 微孔板或比色皿
- 微量移液管和吸頭
- 酶標儀或分光光度計
- 蒸餾水
程式:
- 蛋白質標準品的製備:
- 製備一系列已知濃度的蛋白質標準品. 這些標準品將用於建立定量標準曲線. 常見的濃度是 0, 0.125, 0.25, 0.5, 0.75, 和 1.0 毫克/毫升.
- 樣品製備:
- 將蛋白質樣本稀釋至檢測線性範圍內的合適濃度. 如果需要的話, 您可能需要進行初步稀釋以確保樣品落在標準曲線內.
- BCA工作試劑的製備:
- 將 BCA 試劑 A 和 BCA 試劑 B 混合在 50:1 比率 (通常在套件中提供). 確保充分混合.
- 加入標準品和樣品:
- 將蛋白質標準品和樣品的等分試樣移入微孔板的單獨孔中. 每個標準品和樣品應運行一式兩份或一式三份.
- 加入 BCA 工作試劑:
- 將適當體積的 BCA 工作試劑加入含有標準品和樣本的每個孔中. 充分混合.
- 孵:
- 在適當的溫度下孵育微孔板 (通常為 37°C) 為了 30 分鐘讓顏色反應發生.
- 測量:
- 測量每個孔的吸光度 562 nm 使用酶標儀或分光光度計.
- 標準曲線的製作:
- 根據已知濃度繪製標準品的吸光度值以建立標準曲線.
- 樣品定量:
- 使用標準曲線根據吸光度來決定樣品的蛋白質濃度.
- 數據分析:
- 根據標準曲線計算樣本中蛋白質的濃度. 大多數酶標儀都有可以協助進行這種分析的軟體.
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