產品名稱
丙型肝炎病毒核酸檢測試劑盒 (聚合酶鍊式反應-螢光探針法)
包裝規格
48 時間
產品介紹
- 試劑盒用於C型肝炎病毒的體外定量測定 (丙型肝炎病毒) 核酸 (核糖核酸) 血清樣本中.
- 它適用於需要 HCV 感染檢測的患者和接受C型肝炎抗病毒治療的患者.
- 此試劑盒可檢測HCV臨床常見類型, 包括類型 1 到 6.
- 主要監測丙型肝炎患者血液中HCV RNA含量和變化，以評估治療反應和有效性.
- 然而, 不應僅依靠此測試來評估患者的病情.
- 綜合評價, 結合臨床表現和其他實驗室檢測指標, 是必要的.
- 該試劑盒不應用於 HCV 血源篩檢.
- 該試劑盒使用含有磁珠的裂解液從血清樣本中萃取 HCV RNA，並在同一管中擴增.
- HCV RNA 以逆轉錄酶逆轉錄為 HCV cDNA，並使用 TaqMan 探針技術進行即時檢測定量.
- 此試劑盒的校正和品質控制產品是含有滅活丙型肝炎病毒的臨床血清樣本.
- 該試劑盒透過檢測內部標籤來監測樣本中的 PCR 抑制劑，以避免假陰性.
產品詳情
| 物品 | 產品資訊 | 基礎 | 規格及裝載 |
|---|---|---|---|
| RLB | 核酸萃取試劑 | 丙型肝炎病毒裂解物 (包括磁珠) | 氫氧化鈉, 氯化鉀, Tris鹼基, 和構象磁珠 |
| RWB | HCV沖洗液 | 氯化鉀, 醋酸鈉 | 25.0每瓶毫升 |
| 1 | PCR擴增試劑 | HCV RT-PCR反應液 | 引子, 探針, 去氧核糖核苷三磷酸, 和鎂離子 |
| 2 | HCV酵素混合物 | M-MLV逆轉錄酶, DNA聚合酶 | A 1001 |
| 3 | 校準 | HCV 校準 ① (1.0~3.0) 10^6 TU/毫升 | 固定值 HCV 陽性血清樣本 (失活的) |
| 4 | 校準 | HCV 校準 ② (1.0~3.0) 10^2國際單位/毫升 | 固定值 HCV 陽性血清樣本 (失活的) |
| 5 | 校準 | HCV 校準 ③ (1.0~3.0) 10^4國際單位/毫升 | 固定值 HCV 陽性血清樣本 (失活的) |
| 6 | 校準 | HCV 校準 ④ (1.0~3.0) 單位/毫升 | 固定值 HCV 陽性血清樣本 (失活的) |
| 7 | 品質控制產品 | HCV 強陽性品質管制產品 (0.5~5.0) 單位/毫升 | HCV 陽性混合血清樣本 (已經失活) |
| 8 | 品質控制產品 | HCV弱陽性品管品 (100〜700) 國際單位/毫升 | HCV 陽性混合血清樣本 (已經失活) |
| 9 | 品質控制產品 | HCV 陰性品質控制產品 | HCV 陰性混合血清樣本 (已經失活) |
| 10 | 內部標籤 | HCV 內部標籤 | 內標核酸模板 |
評論:
A. 校準器產品參數 (①～④) 強陽性和弱陽性品控產品的固定值可能因批次而異 (全部在指定範圍內). 詳情請參閱套件中的附頁.
乙. 請勿混合不同批號的套件中的成分.
C. 自備檢測物品包括0.2ml PCR反應管, 離心機, 各種規格移液管及吸頭, 磁力架, 以及公司推薦的磁力架.
儲存條件和有效期限:
- 核酸萃取試劑盒: 存放那個 2 至 8°C.
- PCR擴增試劑盒: -20℃±5℃保存，避免反覆凍融 (不多於 3 次).
- 有效期限: 該套件的有效期限為 12 月. 請在有效期限內使用. 生產日期和有效期限可在標籤上找到.
- 模擬運輸實驗顯示運輸條件不會影響產品的穩定性和有效性. 然而, 運輸時間不應超過 7 天.
適用儀器:
- SLA-96P
- MX3000P/3005P
- AB17500實時螢光PCR儀
樣品要求:
- 適用樣品類型: 血清.
- 樣本採集: 使用無菌注射器採集2-5ml靜脈血並將其置於無菌乾燥管中 (最好有分離膠) 在室溫下 30 分分鐘. 1500g 離心 35 分鐘分離血清和細胞. 轉移上清液 (避免紅血球) 放入不含 DNA 和 RNA 酵素的無菌離心管中保存.
- 貯存: 血清樣本在 2-8°C 下保存不應超過兩週. -20°C以下長期儲存是可以的, 但避免反覆凍融. 測試前樣品應恢復至室溫.
- 運輸: 標本應與乾冰或泡沫箱一起運輸, 冷凍的, 並密封.
校準方法:
(我) 試劑製備 (試劑準備區):
- 取出各種試劑成分並使其達到室溫.
- 萃取物的製備: 充分混合 HCV 裂解液 (RLB) 使用前含有磁珠. 按以下比例混合 (HCV裂解物1501/人 + HCV內標1.01/人). 立即將1501/孔分裝到PCR擴增管中, 確保提取物位於管底部. 是否有黏壁萃取物和磁珠, 在操作台上輕輕振盪，確保它們到達管底部.
- PCR 擴增試劑製備: 依樣本數配製HCV RT-PCR反應液和HCV酶混合液, HCV陰性品質控制產品, HCV弱陽性品管品, HCV強陽性品管品, 和 HCV 校準產品. 按以下比例混合 (38.01 HCV RT-PCR反應液/人 + HCV酵素混合物2.01/人), 充分混合至 PCR-Mix 即可立即使用.
(二) 核酸萃取與純化 (標本處理區):
- 添加 1001 待檢測樣本或 HCV, 丙型肝炎病毒, 丙型肝炎病毒, 和 HCV 校準. 輕輕吹勻2~3次, 然後在室溫下靜置 5 分分鐘.
- 將 PCR 管轉移到磁力架上 (公司推薦的) 並代表 3 分分鐘. 用移液器或負壓裝置吸乾上清液, 小心不要去除磁珠.
- 將 PCR 管保持在磁力架上, 添加 2501 HCV 沖洗液 (RWB) 到每口井, 代表 1 分分鐘, 然後用移液管或負壓裝置吸乾上清液, 確保沒有殘留液體.
- 重複步驟 3 用 RWB 再次清洗, 小心不要在 PCR 管底部留下殘留液體.
(三、) 擴增試劑添加 (標本處理區): 將準備好的 PCR-Mix 加入至 401 每孔加入含有核酸磁珠的PCR管. 蓋上放大管, 並輕輕彈起使磁珠反轉, 確保 PCR-Mix 充分混合. 水平瞬時離心. 將PCR反應管轉移至檢測區域，置於螢光定量PCR儀上進行檢測.
(四號) PCR擴增 (測試區):
- 將PCR反應管放入擴增儀中, 設定 HCV 陰性品質控制, HCV 弱陽性品質控制, HCV 強陽性品質管制, HCV校準①~④, 以及按照相應順序進行測試的樣品. 設定樣品名稱和校準產品濃度.
- 執行螢光 PCR 擴增程序, 使用 SLA-96P 如下 (MX3000P/3005P 和 ABI7500P 類似).
| 步 | 溫度 (℃) | 時間 | 重複號碼 |
|---|---|---|---|
| 反轉錄 | 45 | 15 分分鐘 | 1 |
| 預變性 | 95 | 5 分分鐘 | – |
| 變性 | 94 | 15 秒數 | 50 |
| 退火, 伸長, 和螢光採集 | 58 | 45 秒數 | (收集螢光) |
| 頻道選擇 | – | – | – |
結果獲取:
- 放大曲線說明: 通常, 擴增曲線呈現S型模式.
- 基線設定: 選擇穩定的螢光背景區域作為基線.
- 閾值設定: 應超過陰性質控品擴增曲線的最高點.
- 結果分析: 設定基線和閾值線後, 分析結果. 選擇FAM通路取得樣品和品管產品測試結果; 根據需要使用 HEX 或 VIC 通道. (具體設定請參考儀器使用說明書).
參考值:
- 檢測下限為 15 國際單位/毫升, 定量限為 50 國際單位/毫升, 目標 Ct 值為 40, 和內標 Ct 40.
實驗效果判斷:
- 所有校準產品應表現出≥0.980的正線性相關係數.
- 陰性品質控制產品必須顯示未偵測到, 內標 Ct 值為 40.
- 強陽性質控的Ct值應為 <32, 範圍從 (0.5 到 5.0) x 10^4 國際單位/毫升; 弱陽性 QC Ct 值應為 <37, 量化結果範圍為 (100 到 700) 國際單位/毫升.
- 必須在同一實驗中滿足這些要求; 否則, 結果被視為無效並需要重新測試.
測試結果的解釋:
- 對於50~1.010^8 IU/ml之間的樣本檢測結果, 呈S型曲線, 樣本 Ct 值 40, 和內標Ct值 40, 結果有效，可直接報告為陽性並附有相應的濃度值.
- 若樣本檢測結果超過1.010^8 IU/ml, 稀釋樣品並重新測試.
- 如果樣本測試結果是 <50 IU/ml 丙型肝炎病毒 RNA, 樣本 Ct 值為 40 和內標Ct值 40, 病毒量低, 並可直接報告結果, 雖然濃度僅供參考.
- 如果樣本測試結果是 <15 IU/ml 丙型肝炎病毒 RNA, 樣本 Ct 值為 40 和內標Ct值 40, 報告的濃度低於試劑盒的下限; 如果內標異常或缺失, 結果無效，需要調查和重新測試.
檢測方法的局限性:
- 臨床診斷和治療應考慮患者症狀, 病史, 和其他測試.
- 不正確的樣品處理可能會產生不準確的結果.
- 其他樣品類型在使用前需要驗證.
- HCV RNA 定量取決於幾個因素.
- 此檢測試劑盒針對特定 PCR 儀器進行了優化.
產品性能指標:
- 經國家標準材料檢測，合格率 100%.
- 定量限為 50 國際單位/毫升, 最低檢測極限為 15 國際單位/毫升.
- 精密度評估變異係數≤5%.
- 線性範圍為 50 其中 1.010^8 IU/ml, 線性相關係數≥0.980.
- 檢測 HCV 類型 1 到 6.
- 表現出特異性，沒有交叉反應或來自常見物質的干擾.
- 比較研究顯示可靠性.
注意力:
- 該試劑盒用於體外測試. 使用前查看說明書.
- 確保因病毒而得到適當處理 RNA萃取 和PCR擴增參與.
- 遵循既定的安全協議.
- 儲存條件: 核酸萃取試劑盒保存於 2 至 8°C; PCR 擴增試劑盒儲存於-20°C ± 5°C.
- 有效期限為 12 月; 檢查生產日期和有效期限.
- 運輸條件不應超過 7 天.
- 適用樣本類型為血清; 精心收集和處理樣品.
- 樣品不應長期保存或重複冷凍/解凍.
- 使用冷卻方法進行適當的運輸至關重要.
- 試劑製備包括將各成分平衡至室溫並在使用前混合 HCV 裂解物.
- PCR擴增試劑依樣本量配製.
- 核酸萃取涉及仔細添加樣品和使用磁性框架.
- 擴增試劑添加和PCR擴增應遵循精確的步驟.
- 螢光 PCR 擴增程序需要遵守儀器特定的方案.
- 結果的校準和解釋應仔細進行.
- 測試限制, 包括影響結果的潛在突變, 必須考慮.
- 應密切注意產品性能指標和注意事項，以便準確檢測.
- 持續的品質控制和遵守安全協議對於獲得可靠的結果至關重要.
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