動物/細胞基因組 DNA 小型萃取試劑盒

1. 試劑盒的組成

規格	50時間	100時間
貓. 不.	SN0221	SN0222
DNA萃取柱 (放)	50 (放)	100 (放)
試劑緩衝液IV	20 毫升	2×20 毫升
試劑緩衝液CPLU	30 毫升	30 毫升
洗滌緩衝液 1	15 毫升	2 × 15 毫升
洗脫緩衝液	20 毫升	20 毫升
蛋白酶K	1毫升	2x1毫升
rnasea	1毫升	1毫升
使用說明書	1	1

2. 貯存

該試劑盒應在室溫下保存 (15-25℃) 並且在乾燥條件下, 保存期限為 12 月. DNA 萃取純化柱可保存 1 在涼爽乾燥的環境中度過一年. 蛋白酶 K 和 核糖核酸酶A 含防腐劑, 允許在室溫下運輸, 但為了長期儲存, 應保存在-20℃.

3. 試劑盒使用說明

3.1 本試劑盒適用於分子生物學研究，不得用於疾病診斷或治療.

3.2 試劑盒中部分成分含有刺激物. 建議採取防護措施，例如穿著防護衣和護目鏡.

3.3 本試劑盒使用過程中, 高速離心機, 水浴 (金屬浴), 渦旋混合器, 無水乙醇, 無菌去離子水, 和EP管需用戶自備.

4. 試劑盒簡介

動物/組織 DNA純化 套件為動物組織和細胞培養DNA純化提供了快速有效的解決方案, 廣泛適用於動物組織和細胞培養物.

該DNA快速純化試劑盒迅速從動物和細胞中提取總DNA, 直接產生可用於的DNA 聚合酶鍊式反應, 南方印跡, 和類似的應用. 純化過程不需要有毒劑，例如苯酚 - 氯仿, 使此DNA純化試劑盒高度適用於其他各種樣品.

5. 實驗原理和程序

6. 提取過程

開始實驗前:

A. 試劑緩衝液IV 傾向於在低溫條件下沉澱. 建議以65℃加熱 5 分分鐘. 降水溶解後, 可以正常使用.

乙. 使用之前, 加入規定量的無水乙醇 洗緩衝 1 如試劑瓶標籤上所示, 並在標籤上標記檢查以指示添加無水乙醇.

C. 洗脫緩衝液是 0.1x TE 解決方案 EDTA 含量極低. EDTA是否可能影響後續實驗, 建議用無菌去離子水更換洗脫緩衝液.

1. 樣品處理:

A. 服用細胞培養, 離心機在 12,000 轉速為 1 分鐘收集細胞, 並儘可能吸引上清液. 加入250μl的試劑緩衝液IV和10μLRNASEA (10 毫克/毫升) 到收集的細胞, 徹底暫停, 並在 65°C 下孵育 10 分分鐘.

乙. 研磨組織不超過 25 使用液氮毫克進入細粉. 加入200μl試劑緩衝液IV, 20μL蛋白酶K (10 毫克/毫升), 和10μLRNASEA (10 毫克/毫升) 到粉末, 搖勻, 並在 65°C 下孵育 30 分分鐘, 在此期間搖動混合物四次.

2. 添加 200μL試劑緩衝液CPLU 加入裂解液並充分混合. 如果出現白色沉澱, 它可以不受干擾; 一旦沉澱消失，它將不會影響隨後的實驗.

3. 添加 200微升無水乙醇 並充分混合. 可能會發生一些降水, 但不影響後續實驗.

4. 將獲得的液體應用於DNA提取純度柱 (袖子) (每次約650~700μl), 讓它坐在室溫下 2 分分鐘, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄收集的廢棄物, 並將收集管重新插入純化管柱進行下一步.

5. 放置DNA萃取純化管柱 (袖子) 進入新的系列袖子, 添加 700微升的 洗緩衝 1, 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 丟棄廢棄物, 並放置DNA萃取純化管柱 (袖子) 回到下一步.

(筆記: 確認在沖洗緩衝液中添加無水乙醇 1.)

6. 添加 500微升的 洗緩衝 1 至DNA萃取純化管柱 (袖子), 離心機在 12,000 轉速為 30 秒, 適當地擴展離心時間以確保膜乾燥.

(筆記: 乙醇對隨後的實驗有重大影響; 所以, 膜乾性至關重要. 離心後, 確保在洗脫前沒有乙醇. 之後丟棄廢物和收集管. 用洗滌緩衝液沖洗後 1, DNA純化柱上的膜應具有微弱的顏色. 離心後仔細卸下DNA純化柱, 確保它不會觸及收集管以防止乙醇污染。)

7. 將DNA淨化柱放在新的離心管中, 將100μl洗脫緩衝液直接加到膜上, 離心機在 12,000 轉速為 1 分分鐘, 並收集DNA.

(筆記: 用50μl洗脫緩衝液洗脫DNA可以增加DNA濃度，但會降低總DNA產量。)