ชุดการสกัด DNA/RNA เนื้อเยื่อ

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

ข้อมูลจำเพาะ	50ต	100ต
แมว. เลขที่.	SN0329	SN0330
คอลัมน์ทำความสะอาด DNA (ชุด)	50 (ชุด)	100 (ชุด)
คอลัมน์การแยก RNA (ชุด)	50 (ชุด)	100 (ชุด)
การสกัดอาร์เอ็นเอ บัฟเฟอร์ I	30 มล	2×30 มล
บัฟเฟอร์การสกัด RNA IV	30 มล	2×30 มล
บัฟเฟอร์การกำจัดสารยับยั้ง	2×30 มล	4×30 มล
ล้างบัฟเฟอร์ 1	2×15 มล	3×15 มล
บัฟเฟอร์การชะล้าง	20 มล	20 มล
โปรตีนเค	1มล	2x1มล
คู่มือการใช้งาน	1	1

 

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) ในสภาพแห้งและมีเสถียรภาพสำหรับ 12 เดือน. Proteas, อนุญาตให้ขนส่งที่อุณหภูมิห้อง; อย่างไรก็ตาม, สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดมีสารระคายเคือง; ขอแนะนำให้ใช้ความระมัดระวังที่จำเป็น (เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา).

3.3 การใช้ชุดอุปกรณ์นี้ต้องใช้อุปกรณ์เพิ่มเติม เช่น เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, ไนโตรเจนเหลว, คลอโรฟอร์ม, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และท่ออีพี.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

ชุดตัวอย่าง DNA/RNA แยกและการทำให้บริสุทธิ์พร้อมกันให้การแก้ปัญหาการทำให้บริสุทธิ์ที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับตัวอย่างเนื้อเยื่อ DNA/RNA. ชุดนี้มีระบบ lysis สองชุด, เหมาะสำหรับเนื้อเยื่อและเซลล์ตัวอย่างต่างๆ, รวมถึงพืชส่วนใหญ่, สัตว์, แบคทีเรีย, ฯลฯ.

ชุดการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็ว DNA/RNA สามารถแยก DNA/RNA ทั้งหมดจากตัวอย่างภายใน 1 ชั่วโมง. DNA/RNA ที่สกัดสามารถใช้โดยตรงสำหรับ RT-พีซีอาร์, การซับภาคเหนือ, ฯลฯ. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดไม่จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เป็นพิษเช่นฟีนอลคลอโรฟอร์ม.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ข้อควรระวังก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. ก่อนใช้งาน, เติมเอทานอลสัมบูรณ์ตามจำนวนที่ระบุลงไป ล้างกันชน 1 ตามฉลากบนขวดรีเอเจนต์, และทำเครื่องหมายตรวจสอบบนฉลากเพื่อระบุการเพิ่มเอทานอลสัมบูรณ์.

บี. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ 0.1x โซลูชัน TE ด้วยปริมาณ EDTA ที่น้อยที่สุด. หาก EDTA มีผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้ใช้น้ำที่ปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแทนแทนบัฟเฟอร์การชะ.

ค. บัฟเฟอร์การสกัด RNA ฉันได้รับการออกแบบมาสำหรับการสกัดตัวอย่างพืชและเชื้อรา, ในขณะที่ RNA Extraction Buffer IV ส่วนใหญ่ใช้สำหรับเนื้อเยื่อสัตว์, เลือด, และเนื้อเยื่อตัวอย่างอื่น ๆ.

1. การประมวลผลตัวอย่าง:
2. วัสดุเนื้อเยื่อพืช/สัตว์: รวบรวมตัวอย่างโดยใช้ไนโตรเจนเหลว, บดวัสดุที่รวบรวมได้โดยตรงในไนโตรเจนเหลว, และดำเนินการตามขั้นตอน 2 (แนะนำให้ใช้บัฟเฟอร์การสกัด RNA I).
3. เนื้อเยื่อเซลล์: เครื่องหมุนเหวี่ยงและรวบรวม <107 เซลล์ที่ถูกระงับใน 1.5 หลอดเซนติเมตร ML, ดำเนินการต่อไปอย่างรวดเร็ว 2 (แนะนำให้ใช้ RNA Extraction Buffer III).
4. เพิ่ม 500μl RNA Extraction Buffer I/RNA Buffer IV, 10μl proteinase k, กระแสน้ำวนและผสมให้ละเอียด. ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีการผสมอย่างอ่อนโยนในขั้นตอนนี้เพื่อป้องกันการตัดเชิงกลของ DNA เนื้อเยื่อและลดผลผลิต DNA.
5. โอนไลเซทไปยังก การทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ คอลัมน์, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที, รวบรวมการกรอง (RNA มีอยู่ในตัวกรอง). ณ จุดนี้, DNA ถูกดูดซับไว้ในคอลัมน์ DNA และสามารถเก็บไว้สั้น ๆ ที่ 4 ° C ในขณะที่รวบรวม RNA ในขั้นตอนถัดไปพร้อมกัน.

(บันทึก: หากตัวอย่างเป็นเนื้อเยื่อพืช, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 10 นาที, และเพิ่ม supernatant ลงในคอลัมน์การผูก DNA.)

4. ประเมินปริมาณของการกรองอย่างแม่นยำ, เพิ่ม 5 ครั้งที่เอทานอลสัมบูรณ์, ผสมให้เข้ากัน. หากเกิดฝนตก, มันไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลองครั้งต่อไป.
5. เพิ่มของเหลวที่ได้รับในคอลัมน์การล้าง RNA (ประมาณ650-700μlในแต่ละครั้ง), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเหลวที่เก็บรวบรวมไว้, และใส่ท่อรวบรวมกลับเข้าไปในคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์สำหรับขั้นตอนต่อไป.
6. ทำซ้ำขั้นตอน 5, เพิ่มของเหลวที่เหลือลงในคอลัมน์การล้าง RNA, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเสียของเสียและหลอดเก็บรวบรวม, วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ในหลอดคอลเลกชันใหม่, และเตรียมพร้อมสำหรับการรวบรวม DNA พร้อมกัน.
7. เพิ่ม 600บัฟเฟอร์การกำจัดสารยับยั้งμl ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์การสกัด RNA, ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเสียของเสีย, และใส่คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ DNA/RNA กลับเข้าไปในหลอดคอลเลกชันสำหรับขั้นตอนต่อไป.
8. เพิ่ม 700μlล้างบัฟเฟอร์ 1 ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์การสกัด RNA, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที. ขยายเวลาการหมุนเหวี่ยงอย่างเหมาะสมเพื่อให้แน่ใจว่าเมมเบรนจะแห้งอย่างทั่วถึง.

(บันทึก: ยืนยันว่ามีการเพิ่มเอทานอลสัมบูรณ์ในการล้างบัฟเฟอร์ 1. การปรากฏตัวของเอทานอลมีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญต่อการทดลองครั้งต่อไป, ดังนั้นการอบแห้งของเมมเบรนจึงมีความสำคัญ. หลังจากการปั่นแยก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีเอทานอลอยู่ก่อนทำการชะล้าง, จากนั้นทิ้งของเสียของเสียและหลอดเก็บรวบรวม.

หลังจากล้างด้วยบัฟเฟอร์ล้าง 1, เมมเบรนของคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ควรมีสีเล็กน้อย. หลังจากการปั่นแยก, ค่อยๆ ถอดคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ RNA ออก, ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีการติดต่อกับหลอดคอลเลกชันเพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนเอทานอล.)

9. วางคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์ DNA/RNA ลงในหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงใหม่, หยด 50-100 μl elution buffer บนเมมเบรน, ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที (15° C-25 ° C), ปั่นแยกที่มากกว่า 8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที.

(บันทึก: เพิ่มกรดนิวคลีอิกด้วย 50 μl elution buffer สามารถเพิ่มความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิก แต่ลดผลผลิตกรดนิวคลีอิกทั้งหมด.)

• บันทึก:

1. โดยทั่วไป, ปริมาณการชะล้างที่มากขึ้นส่งผลให้ประสิทธิภาพการชะ, แต่เพื่อเพิ่มความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิก, สามารถลดปริมาณการชะล้างได้, แต่ไม่ใช่ด้านล่าง 50 ไมโครลิตร.
2. อาร์เอ็นเอ, ในการปรากฏตัวของบัฟเฟอร์การสกัด RNA I/RNA Buffer III III, ไม่ได้ลดลงโดย RNase แต่ควรแยกแยะจาก DNA ในการทดลองครั้งต่อไป. ใช้วัสดุสิ้นเปลืองที่ปราศจาก RNase สำหรับการแยก RNA ทุกครั้งที่ทำได้.