ชุดคราบเม็ดเลือดขาวสเปิร์ม Peroxidase ของ Solarbio(วิธีเอ็น-โทลูอิดีน)

ข้อมูลผลิตภัณฑ์

• รหัสสินค้า: G3410
• ข้อมูลจำเพาะ: 20ต
• พื้นที่จัดเก็บ: เก็บที่ 2-8 ° C, มีอายุการเก็บรักษาที่ 6 เดือน.

เนื้อหาผลิตภัณฑ์:

รายละเอียดสินค้า:

น้ำอสุจิส่วนใหญ่มีเซลล์เม็ดเลือดขาว, ส่วนใหญ่เป็นเม็ดเลือดขาว polymorphonuclear (PMNS, นิวโทรฟิล). บางครั้ง, เซลล์เม็ดเลือดขาวสามารถแยกแยะได้จากเซลล์สเปิร์มและสเปิร์มเซลล์ในรอยเปื้อนน้ำอสุจิโดยใช้วิธีการย้อมสี papanicolaou. การแยกเซลล์เม็ดเลือดขาวส่วนใหญ่อาศัยความแตกต่างในการย้อมสี, ขนาด, และสัณฐานวิทยาของนิวเคลียส. leukocytes polymorphonuclear มีลักษณะทางสัณฐานวิทยาคล้ายกับเซลล์สเปิร์มหลายนิวเคลียส, แต่ leukocytes polymorphonuclear stain สีฟ้าอ่อนในขณะที่เซลล์สเปิร์มเปื้อนแสงสีแดง. ขนาดของนิวเคลียสยังช่วยในการแยกความแตกต่าง: นิวเคลียสของเม็ดเลือดขาวโมโนนิวเคลียร์มีขนาดผันผวนอย่างกว้างขวาง, ตั้งแต่ประมาณ7μmสำหรับเซลล์เม็ดเลือดขาวถึงมากกว่า15μmสำหรับแมคโครฟาจ. จำนวนเซลล์เม็ดเลือดขาวในน้ำอสุจิสามารถวัดปริมาณได้โดยใช้เทคนิคอื่น ๆ.

หลักการของคราบ peroxidase สำหรับเซลล์เม็ดเลือดขาวน้ำเชื้อ (วิธี orthotoluidine) คือชนิดหลักของเซลล์เม็ดเลือดขาวในน้ำอสุจิคือ granulocytes peroxidase-positive, ซึ่งสามารถคัดกรองได้โดยใช้การย้อมสี peroxidase. วิธีนี้อย่างรวดเร็ว, ราคาไม่แพง, และใช้งานได้จริงสำหรับการคัดกรองเริ่มต้นของ granulocytes. แม้ว่าเทคนิคนี้จะมีข้อได้เปรียบในการใช้งานง่าย, ไม่สามารถตรวจจับสิ่งต่อไปนี้ได้: leukocytes polymorphonuclear ที่เปิดใช้งานแล้วและปล่อยเม็ดของพวกเขาไปแล้ว; ②ชนิดเม็ดเลือดขาวอื่น ๆ ที่ไม่มี peroxidase, เช่น lymphocytes, แมคโครฟาจ, และ monocytes. ผลิตภัณฑ์นี้สามารถใช้เพื่อแยกความแตกต่างของเม็ดเลือดขาว polymorphonuclear จากเซลล์สเปิร์มหลายนิวเคลียสที่ไม่มี peroxidase.

ขั้นตอนการดำเนินงาน (สำหรับการอ้างอิงเท่านั้น):

1. เตรียมโซลูชันการทำงานของ orthotoluidine: เพิ่มสารละลายแอมโมเนียมคลอไรด์ 1 มล., 1ML of EDTA Solution, และ10μlของสารออกซิแดนท์ถึง 9ml ของสารละลายสารละลาย, ผสมให้เข้ากัน, และใช้ภายใน 24 ชั่วโมงแห่งการเตรียมการ.
2. ผสมตัวอย่างน้ำอสุจิให้ละเอียด, ผสมน้ำอสุจิ 0.1ml กับโซลูชันการทำงาน 0.9ml.
3. Vortex ระบบกันสะเทือนสเปิร์มสำหรับ 10 วินาทีและปล่อยให้มันยืนที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 20-30 นาที. อีกทางหนึ่ง, ใช้โยกหลอดเพื่อการกวนอย่างต่อเนื่อง.
4. หลังจาก 20-30 นาที, ผสมสเปิร์มช่วงล่างอีกครั้งและเติมตัวอย่างลงในสระนับทั้งสองด้านของ hemocytometer.
5. วาง hemocytometer ในแนวนอนในห้องชื้นที่อุณหภูมิห้องอย่างน้อย 4 นาทีที่จะอนุญาตให้เซลล์ชำระ.
6. ใช้ 200 หรือกล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟส 400 เท่าเพื่อสังเกตและนับอย่างน้อย 200 เซลล์ peroxidase-positive.

ข้อมูลจำเพาะ:

• รีเอเจนต์ (ก): สารละลายแอมโมเนียมคลอไรด์อิ่มตัว 2ml, เก็บไว้ที่ 2-8 ° C.
• รีเอเจนต์ (บี): โซลูชัน EDTA 2ml, เก็บไว้ที่ 2-8 ° C.
• รีเอเจนต์ (ค): โซลูชันพื้นผิว orthotoluidine 20ml, เก็บที่ 2-8 ° C, หลีกเลี่ยงแสง.
• รีเอเจนต์ (ดี): ออกซิแดนท์ 1ml, เก็บไว้ที่ 2-8 ° C.

ผลการย้อมสี:

เซลล์ peroxidase-positive เป็นสีน้ำตาล, ในขณะที่เซลล์ peroxidase-negative ยังคงไม่มีอยู่.

ข้อควรระวัง:

1. เตรียมโซลูชันการทำงานของ orthotoluidine ก่อนการใช้งานและไม่เก็บไว้เป็นระยะเวลานานหลังจากการเตรียมการ.
2. หากอุณหภูมิแวดล้อมในห้องย้อมสีต่ำ, ใช้ศูนย์บ่มเพาะหรืออ่างน้ำเพื่อให้กระบวนการย้อมสีเสร็จสมบูรณ์.
3. เมื่อตรวจสอบสระนับ, นับต่อไปอย่างน้อย 200 เซลล์ peroxidase-positive ต่อกริดจนกว่าจะนับกริดที่สมบูรณ์; อย่าหยุดนับว่าอยู่ตรงกลางของกริด.
4. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ, สวมเสื้อโค้ทแล็บและถุงมือที่ใช้แล้วทิ้งในระหว่างการใช้งาน.
5. ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้นและไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยทางคลินิกหรือวัตถุประสงค์อื่น ๆ.