ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (ที-เอโอซี) ชุดทดสอบ
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์
หมายเลขแมว: พ.ศ. 1310
ขนาด：50ที/48ส
ส่วนประกอบ:
สารสกัดโซลูชั่น: ของเหลว 50 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃, พรีคูลก่อนใช้งาน.
รีเอเจนต์ I: ของเหลว 35 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
รีเอเจนต์ II: ของเหลว 20 มล.×1. เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃ ในที่ร่ม.
รีเอเจนต์ III: ของเหลว 5 มล.×1. เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃ ในที่ร่ม.
มาตรฐาน: ผง×1, 10 มิลลิกรัมของ FeSO4·7H2O. วิธีแก้ปัญหาการทำงาน: เพิ่ม 0.9 น้ำกลั่นหนึ่งมิลลิลิตรและกรดซัลฟิวริกเข้มข้น20ไมโครลิตร (H2SO4) ไปที่แบบฟอร์ม 40 สารละลายมาตรฐาน FeSO4 ไมโครโมล/มิลลิลิตร. ส่วนผสมของสารละลาย (เตรียมตัวเมื่อจะใช้สารละลาย): รีเอเจนต์ I : รีเอเจนต์ II: รีเอเจนต์ III= 7:1:1, ฟักที่อุณหภูมิ 37°C ก่อนใช้งาน.
รายละเอียดสินค้า:
ชุดนี้ใช้เพื่อตรวจจับระดับสารต้านอนุมูลอิสระรวมของสารต้านอนุมูลอิสระและเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระในตัวอย่าง. ส่วนใหญ่จะใช้ในการศึกษาทางชีววิทยา, การศึกษาทางการแพทย์และเภสัชกรรมเพื่อตรวจหาความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระโดยรวมของสารละลายต้านอนุมูลอิสระ.
ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด, Fe3+ -TPTZ ลดลงเป็นสีน้ำเงิน Fe2+ -TPTZ. ปฏิกิริยาสีสะท้อนถึงความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่, เครื่องหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิต่ำ, 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล. และน้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
ฉัน. การจัดเตรียมตัวอย่าง:
1. เซรั่ม, พลาสมา, น้ำลาย, หรือตัวอย่างปัสสาวะ
พลาสมา (การแข็งตัวของเลือดด้วยเฮปารินหรือโซเดียมซิเตรต, หลีกเลี่ยงการใช้ EDTA), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 5000 รอบต่อนาที/นาทีสำหรับ 10 นาที, นำส่วนที่อยู่เหนือตะกอนไปทดสอบ. ทานเซรั่ม, ตัวอย่างน้ำลายหรือปัสสาวะเพื่อการตรวจวินิจฉัยโดยตรง. อีกด้วย, คุณสามารถจัดเก็บที่อุณหภูมิ -80 ℃ และตรวจจับภายในได้ 30 วัน.
2. เซลล์หรือเนื้อเยื่อ ตัวอย่าง
เอา 1-2 ล้านเซลล์หรือ 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, เพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด. ใช้โฮโมจิเนทหรืออัลตราซาวนด์เพื่อสลายเซลล์ให้สมบูรณ์และปล่อยสารต้านอนุมูลอิสระ, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10000 รอบ/นาที และ 4°C สำหรับ 5 นาที, นำส่วนที่อยู่เหนือตะกอนไปทดสอบ. วัดความเข้มข้นของโปรตีนหากจำเป็น.
ครั้งที่สอง. ขั้นตอนการพิจารณา:
- เจือจาง 40 สารละลายมาตรฐาน FeSO4 ไมโครโมล/มล 0.1, 0.05, 0.025, 0.0125, 0.00625, 0.003125 ไมโครโมล/มล, เอา 500 ไมโครลิตรของสารละลายมาตรฐาน (น้ำกลั่นเพื่อการควบคุมที่ว่างเปล่า), เพิ่ม 500 μL ของรีเอเจนต์ II. ผสมให้เข้ากัน 10 นาที, ตรวจจับการดูดกลืนแสงใน 593 นาโนเมตร, คำนวณ ΔA=AS-AB. (เช่น: หลอดสารละลายมาตรฐาน, เอบี: หลอดควบคุมว่างเปล่า) ความเข้มข้นสุดท้ายของ Fe2+ คือ 0.05、0.025、0.0125、0.00625、
0.003125、0.00156 ไมโครโมล/มล.
- เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ก่อน 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 593 nm และตั้งค่าเป็นศูนย์ด้วยการกลั่น
- เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:
| ชื่อรีเอเจนต์ | หลอดเปล่า (เอบี) | หลอดทดลอง (ที่) |
| ส่วนผสมของสารละลาย (ไมโครลิตร) | 900 | 900 |
| ตัวอย่าง (ไมโครลิตร) | 30 | |
| น้ำกลั่นสองเท่า (ไมโครลิตร) | 120 | 90 |
| ผสมให้เข้ากันแล้วทำปฏิกิริยา 10 นาที, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น, ตรวจจับการดูดกลืนแสงใน 593 นาโนเมตร. คำนวณ ΔA’=AT – เอบี.
(บันทึก: หลอดเปล่าจะต้องได้รับการทดสอบหนึ่งครั้งหรือสองครั้งในทุกการทดลอง) |
||
สาม. การคำนวณ:
- สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน
ใช้ความเข้มข้นสุดท้ายของ Fe2+ เป็นแกน X, △A เป็นแกน Y, สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน, รับสมการการถดถอยเชิงเส้น y=kx+ b, เอา ∆A’ เข้าไปในสมการเพื่อให้ได้ x (ไมโครโมล/มล).
- คำจำกัดความของหน่วย: ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของตัวอย่างระบุด้วยความเข้มข้นของไอออนของเหลวมาตรฐานที่จำเป็นสำหรับการเปลี่ยนแปลงการดูดกลืนแสงที่เท่ากัน(∆A).
ก. โปรตีน ความเข้มข้น:
ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (ไมโครโมล/มิลลิกรัมโปรต) = x × วีอาร์วี۞ (เทียบกับ× CPR) = 34× x KW ซีพีอาร์
บี. ตัวอย่าง น้ำหนัก
ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (น้ำหนักไมโครโมล/กรัม) = x × วีอาร์วี۞ (เทียบกับ ۞ เทียบกับxW) =34× x÷ W
ค. เซลล์ จำนวน
ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (ไมโครโมล/104เซลล์) = x × วีอาร์วี۞ (กับ ×Vsvñn) = 34× x÷ น
ดี. สารละลาย ปริมาณ
ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (ไมโครโมล/มล) =x× VRv÷ Vs =34×x
เชือก: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 1.02 มล; เทียบกับ: ปริมาณตัวอย่าง, 0.03 มล;
เทียบกับ: ปริมาณการสกัด, 1 มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;
ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล;
n: จำนวนเซลล์, หน่วยขึ้นอยู่กับ 104 (หมื่น).
บันทึก:
- Reagent II ระคายเคืองต่อร่างกายมนุษย์, กรุณาสวมเสื้อผ้าห้องปฏิบัติการและน้ำยาง
- ตัวอย่างไม่ควรปรากฏเป็นสีน้ำเงินภายใต้สภาวะที่เป็นกรด, หรือจะรบกวนผลลัพธ์ของตัวอย่าง
- ผงซักฟอก เช่น Tween, ไทรทัน, NP-40 และสารรีดักท์ เช่น DTT, ไม่ควรเติมเมอร์แคปโตเอธานอลลงใน
- หากค่าการดูดกลืนแสงที่กำหนดโดยตัวอย่างอยู่นอกช่วงเส้นโค้งมาตรฐาน, ควรเจือจางหรือทำให้ตัวอย่างเข้มข้นอย่างเหมาะสมก่อน
- ควรเก็บชุดอุปกรณ์ไว้ที่ 2-8 ℃.
ตัวอย่าง:
- เติมแชมร็อก 0.1 กรัมลงในสารละลายสารสกัด 1 มล. แล้วบดให้ละเอียดบนน้ำแข็ง, ใช้ส่วนเหนือตะกอน, ปฏิบัติตามขั้นตอนการกำหนดเพื่อดำเนินการ, ด้วยเพลตก้นแบน 96 หลุมในการคำนวณ: ∆A=A(ต)-ก(บี)=0.909-0.148=0.761, เส้นโค้งมาตรฐาน: y=21.056x-0.0087, คำนวณ x=0.037, ตามมวลของตัวอย่างเพื่อคำนวณความสามารถต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด (มวลไมโครโมล/กรัม) =34×x۞W=34×0.037۞0.1=12.85 ไมโครโมล/กรัม มวล.
อ้างอิง：
[1] เปลเลกรินี่ เอ็น, เซราฟินี เอ็ม, ซัลวาตอเร เอส, และคณะ. ความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมดของเครื่องเทศ, ผลไม้แห้ง, ถั่ว,
พัลส์, ซีเรียล, และขนมหวานที่บริโภคในอิตาลีได้รับการประเมินโดยการทดสอบในหลอดทดลองที่แตกต่างกันสามแบบ[เจ]. โภชนาการระดับโมเลกุล & การวิจัยด้านอาหาร, 2006, 50(11): 1030-1038.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง:
BC1320/BC1325 ชุดทดสอบความสามารถในการกำจัดไฮดรอกซิลจากหัวรุนแรง
BC1330/BC1335 ชุดทดสอบฟลาโวนอยด์จากพืช
BC1340/BC1345 ฟีนอลรวมของพืช (ทีพี)ชุดทดสอบ
BC1350/BC1355 ชุดทดสอบโปรแอนโทไซยานิดินจากพืช
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์