โซลาร์ไบโอ ซัคซิเนต ดีไฮโดรจีเนส (สธ) ชุดทดสอบกิจกรรม

ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนส (สธ) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์ตรวจจับ: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หมายเลขแมว: BC0950

ขนาด: 50ที/48ส

ส่วนประกอบ

รีเอเจนต์ I: 60 มล.×1, ใหญ่ที่ -20 ℃. รีเอเจนต์ II: 0.6 มล.×1, ใหญ่ที่ -20 ℃. รีเอเจนต์ III: 5 มล.×1, เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃.

รีเอเจนต์ IV: ผง×1, เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃. When the solution will be used, add it into Reagent III to dissolve for use.

รีเอเจนต์ V: ผง×1, เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃. เพิ่ม 4 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นเมื่อจะใช้สารละลาย, the unused reagents are stored at 4℃.

รีเอเจนต์ VI: ผง×1, ใหญ่ที่ -20 ℃. เพิ่ม 3.333 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นเมื่อจะใช้สารละลาย, the unused reagents are stored at 4℃.

คำอธิบาย

ซัคซิเนตดีไฮโดรจีเนส (สธ, อีซี 1.3.5.1) พบมากในสัตว์, พืช, จุลินทรีย์และเซลล์เพาะเลี้ยง. SDH is a marker enzyme of mitochondria, which is a membrane binding enzyme located in the inner membrane of mitochondria. It is also one of the key points of respiratory electron transfer and oxidative phosphorylation. In addition, it provides electrons for the respiratory chain of various prokaryotic cells.

SDH can catalyze the dehydrogenation of succinic acid to fumaric acid. The dehydrogenation can reduce 2,6-dichlorophenol indophenol (DCPIP) under the transfer of phenazine dimethyl sulfate (PMS). 2,6- DCPIP has a characteristic absorption peak at 600 นาโนเมตร. The reduction rate of 2,6-DCPIP is determined by the change of absorbance at 600 นาโนเมตร, which represents the activity of SDH enzyme.

จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้

สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, อ่างน้ำ, tabletop centrifuge, ปิเปตแบบปรับได้, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล, น้ำแข็งและน้ำกลั่น.

มาตรการ

ฉัน. Extraction of SDH:

Accurately weigh 0.1 g of tissue or collect 5 ล้านเซลล์, เพิ่ม 1 mL of Reagent I and 10 μL ของรีเอเจนต์ II, homogenize by using homogenizer/mortar in ice bath, fully grind, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 11000 ×กรัม สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃, นำส่วนลอยเหนือตะกอนมาวางบนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.

ครั้งที่สอง. ขั้นตอน

1. Preheat spectrophotometer for 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 600 nm และตั้งค่าศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
2. Procedure test

Add each reagent to 1 mL glass cuvette in turn, and start timing at the same time of adding Reagent VI, record the initial absorbance A1 at the wavelength of 600 NM สำหรับ 20 วินาที. Then put the cuvette together with the reaction solution into a water bath of 37℃ (สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃ (สายพันธุ์อื่น), and accurate reaction for 1 นาที. Quickly take out the cuvette and dry it, and record the absorbance A2 at 80 seconds at 600 นาโนเมตร. ΔA = A1-A2, obtain ΔAT, ∆AB.

สาม. Calculation of SDH activity

Calculation formula for determination with 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล.

• ความเข้มข้นของโปรตีน

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the consumed of 1 nmol of 2,6-dichlorophenol indophenol per minute in the reaction system every milligram tissue protein.

สธ(U/มก)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε× D)×VRV×109]÷(ซีพีอาร์×VS) ÷T＝1555.556×(ΔAT-ΔAB)__ซีพีอาร์

• น้ำหนักตัวอย่าง

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the consumed of 1 nmol of 2,6-dichlorophenol indophenol per minute in the reaction system every gram tissue.

สธ(u/g)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε× D)×VRV×109]÷(vs ÷ vst × w) ÷T＝1571.111×(ΔAT-ΔAB)۞W

• Germ or cells

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the consumed of 1 nmol of 2,6-dichlorophenol indophenol per minute in the reaction system every 10 thousand germ or cells.

สธ(เซลล์ U/104)＝[(ΔAT-ΔAB)÷(ε× D)×VRV×109]÷(VS÷VST×500) ÷T

＝3.142×(ΔAT-ΔAB)

VRT: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 0.98×10-3 L;

อี: The molar extinction coefficient of 2,6-DCPIP, 2.1×104 L/mol/cm; ง: The light diameter of cuvette, 1 ซม.;

เทียบกับ: ปริมาณตัวอย่าง, 0.03 มล;

VST: Add the volume of Reagent I and Reagent II, 1.01 มล; ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา(นาที), 1 นาที;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;

500: Cells or germ, 5 ล้าน.

บันทึก

1. All reagents and samples shall be placed on ice during the determination to avoid denaturation and deactivation.
2. If ΔA is greater than 0.5, the enzyme solution should be diluted with enzyme extract to obtain ΔA with less than 0.5, which can improve the detection sensitivity.
3. Because the Extract solution contains a certain concentration of protein (เกี่ยวกับ 1 มก./มล), it is necessary to subtract the protein content of the Extract solution itself when determining the protein concentration of the sample.

ตัวอย่างการทดลอง:

1. Take 0.1g of kidney, เพิ่ม 1 mL of Reagent Ⅰ and 10 μL Reagent Ⅱ, grind the homogenate with ice bath, centrifuge at 4℃ and 11000g for 10 นาที, and place the supernatant on ice. According to the determination procedure, the enzyme activity is calculated as follows: ΔAT= A1T- A2T=0.82-0.681=0.139, ΔAB= A1B- A2B=905-0.904=0.001

SDH activity (มวลยู/กรัม) = 961.905×(∆AT- ∆AB) ÷ W =2168.13 U/g mass.

อ้างอิง

• Fattoretti P, Bertoni-Freddari C, Caselli U, และคณะ. Impaired succinic dehydrogenase activity of rat Purkinje cell mitochondria during aging[เจ]. Mechanisms of aging and development, 1998, 101(1-2): 175- 182.

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

BC0710/BC0715 α-Ketoglutarate Dehydrogenase(α-KGDH) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC2150/BC2155 Citric Acid(CA) ชุดทดสอบเนื้อหา

BC0380/BC0385 Pyruvate Dehydrogenase(พีดีเอช) ชุดทดสอบกิจกรรม