Solarbio Pyrophosphate: Fructose 6-phosphate-1 Phosphotransferase Assay Kit

คุณลักษณะ	รายละเอียด
บันทึก	ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ
เครื่องมือตรวจจับ	สเปกโตรโฟโตมิเตอร์
หมายเลขแมว	BC3400
ขนาด	50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 55มล. × 1, stored at 4 องศาเซลเซียส.

รีเอเจนต์ 1: 40มล. × 1, stored at 4 °C and protected from light.

รีเอเจนต์ 2: ผง × 1, stored at -20 °C and protected from light. Just before use, เพิ่ม 6 mL of distilled water to fully dissolve. Unused reagents are stored at -20 °C สำหรับ 1 week after dispensing to avoid repeated freeze-thaw cycles.

รีเอเจนต์ 3: powder × 1, stored at -20 °C and protected from light. Just before use, เพิ่ม 6 mL of distilled water to fully dissolve. Unused reagents are stored at -20 °C after dispensing. Prohibition of repeated freeze-thaw cycles.

รีเอเจนต์ 4: 91µL × 2, stored at 4 °C and protected from light. Just before use, เพิ่ม 0.209 mL of distilled water to fully dissolve. Stored at 4 °C สำหรับ 1 สัปดาห์.

รีเอเจนต์ 5: ผง × 2, stored at -20 °C and protected from light. Just before use, เพิ่ม 0.3 mL of distilled water to fully dissolve. Unused reagents are stored at -20 °C สำหรับ 1 week after dispensing.

รีเอเจนต์ 6: 60 µL × 1, stored at 4 °C and protected from light. Just before use, เพิ่ม 0.6 mL of distilled water to fully dissolve. Stored at 4 °C สำหรับ 1 สัปดาห์.

รายละเอียดสินค้า:

Pyrophosphate: Fructose-6-phosphate-1-phosphotransferase (PFP, EC2.7.1.90) is a cytosolic enzyme that is widely present in plant tissues and catalyzes the phosphorylation of fructose-6-phosphate like phosphofructokinase. As a result, the single PEP catalytic reaction is a reversible reaction, and pyrophosphate is used instead of ATP, which plays an important role in carbon metabolism of photosynthesis.

PFP catalyzes the conversion of fructose 6-phosphate to fructose 1,6-diphosphate, which is converted to dihydroxyacetone phosphate by the action of aldolase and triose phosphate isomerase, and then catalyzed by α-phosphate glycerol dehydrogenase and NADH to from Glycerol 3-diphosphate and NAD. The change in absorbance at 340 nm reflects the level of PFP activity.

Required material

Low temperature centrifuge, สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, water bath/constant temperature incubator, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, 1 mL quartz cuvette, ปิเปตโอน, น้ำแข็งและน้ำกลั่น, ท่ออีพี.

ขั้นตอน:

ฉัน. ตัวอย่าง การสกัด:

1. 1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

According to the mass of the tissue (ก): the volume of the extract solution (มล) เป็น 1: 5 - 10. Suggested 0.1g of tissue with 1mL of extract solution. Fully grind on ice, centrifugated at 20000g and 4℃ for 15 นาที. Supernatant is placed on ice for test.

2. แบคทีเรียหรือเซลล์:

According to the number of cells (104): the volume of the extract solution (มล) เป็น 500 - 1000: 1. Recommend 5 million with 1mL of Extract Solution. Use ultrasonication to split bacteria or cells (power 300W, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 7 วินาที, เวลาทั้งหมด 3 นาที). Centrifugated at, 20000g and 4℃ for 15 นาที. Supernatant is placed on ice for test.

3. Liquids: direct detection.

ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:

• เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ก่อน 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 340 นาโนเมตร, ตั้งค่าศูนย์ด้วยการกลั่น
• เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:

ชื่อรีเอเจนต์ (ไมโครลิตร)	หลอดทดลอง (ต)	หลอดเปล่า (ต)
รีเอเจนต์ 1	670	670
รีเอเจนต์ 2	100	100
รีเอเจนต์ 3	100	100
รีเอเจนต์ 4	10	10
รีเอเจนต์ 5	10	10
รีเอเจนต์ 6	10	10
ตัวอย่าง	100	–
น้ำกลั่น	–	100
หลังจากผสมให้เข้ากันแล้ว, measure the initial value A1 at 340 nm and the absorbance A2 for 30 นาทีที่ 37 °C in a 1 mL quartz cuvette, and record them as A1T, A1B, and A2T, A2B. Calculate ΔA = (A1T-A2T)- (A1B-A2B). บันทึก: รีเอเจนต์ 1, 2, 3, 4, 5, และ 6 can also be formulated into working fluids according to the proportions of the operation table, which is now prepared for use; The blank tubes need only be made 1–2 times.

สาม. Calculation of PFP activity:

1 Calculated by micro quartz cuvette

• Calculated by protein concentration:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as that 1 mg of tissue protein per minute consumes 1 nmol of NADH.

PFP activity (U/มก) =ΔA÷（ε×d）×VRT×109÷(VS×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

• Calculated by sample weight

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as that 1g of tissue per minute consumes 1 nmol of NADH.

PFP activity (น้ำหนักสด U/G) =ΔA÷（ε×d）×VRT×109÷(W ×VS÷VE) ÷T=53.59×ΔA÷W

• Calculated by bacteria or cell amount:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as that 10 thousand bacteria or cells per minute consumes 1 nmol of NADH.

PFP activity (เซลล์ U/104) =ΔA÷（ε×d）×VRT×109÷(VS×N÷VE) ÷T=53.59×ΔA÷N（104）

• Calculated by serum and other liquids:

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as that 1 mL of liquids per minute consumes 1 nmol of NADH.

PFP activity (ยู/มล) =ΔA÷（ε×d）×VRT×109÷VS÷T=53.59×ΔA

VRT: total volume of reaction system, 0.001 ล;

อี: NADH molar extinction coefficient, 6.22 × 103 L/mol/cm; ง: cuvette light path, 1 ซม.;

VS: added sample volume, 0.1 มล;

VE: volume of extract solution added, 1 มล; ต: เวลาการเกิดปฏิกิริยา, 30 นาที;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: มวลตัวอย่าง, 0.1 ก;

109:conversion factor, 1 mol = 109 nmol N: number of cell

2. Calculated by 96-well UV plate:

Modify d = 1 cm in the above formula to d-0.6 ซม. (the light path of a 96-well plate) for calculation.

บันทึก:

1. The number of samples should not be too large to avoid delaying the enzymatic reaction time.

ตัวอย่างการทดลอง:

1. เอา 0.1 g of bean sprouts and add 1 mL of Extract solution for sample processing. After centrifugation to take the supernatant, ดำเนินการตามขั้นตอนการตัดสินใจ. CalculateΔA = (A1T-A2T)-(A1B-A2B)- (1.041-0.963)-0=0.078. The enzyme activity is calculated according to the sample mass.

PFP activity (น้ำหนักสด U/G) =53.59×ΔA÷W=41.8 U/g fresh weight.

สินค้าที่เกี่ยวข้อง:

BC0990/BC0995 Plant Chlorophyll Content Assay Kit

BC2210/BC2215 Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase(GAPDH) ชุดทดสอบกิจกรรม

BC4330/BC4335 Plant Carotenoid Content Assay Kit