เพอรอกซิเดส (พ็อด) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ หมายเลขแค็ตตาล็อก: BC0090 Sizes：50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 60 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ I: 40 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รีเอเจนต์ II: 0.5 ml × 1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. Centrifuge before use. เอา 0.22 mL of reagent II and add 3.33 mL of reagent I, mix it for later use (about 27T). Prepare it for immediate use, or it can be prepared in proportion according to the sample volume.

รีเอเจนต์ III: 10 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.

รายละเอียดสินค้า

เพอรอกซิเดส (พ็อด, อีซี 1.11.1.7) widely exists in animals, พืช, และจุลินทรีย์. It can catalyze the oxidation of phenols and amines by hydrogen peroxide, and has the dual effect of eliminating toxicity of hydrogen peroxide, phenols, and amines. In the presence of hydrogen peroxide, POD can catalyzes H2O2 oxidize specific substrates to produce one substance which has a absorption at 470 นาโนเมตร.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้

สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, transferpettor, 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, น้ำแข็งและน้ำกลั่น.

ขั้นตอน

ฉัน. การจัดเตรียมตัวอย่าง:

ก. แบคทีเรียหรือเซลล์

การรวบรวมแบคทีเรียหรือเซลล์ลงในหลอดเซนติเมตร, the supernatant is discarded after centrifugation. It is suggested to take about 5 ล้านแบคทีเรีย/เซลล์และเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด. Bacteria or cell is splitted by ultrasonication (พลัง: 20% หรือ 200 ว, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 RPM และ 4 ℃สำหรับ 10 นาที, the supernatant is used for test.

บี. เนื้อเยื่อ

It is recommended to take about 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อและเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด, บดน้ำแข็งจนสุด.

เครื่องปั่นแยกที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃, the supernatant is used for test.

ค. เซรั่ม (พลาสมา) ตัวอย่าง: Detect sample

ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน

1. Preheat spectrophotometer for 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 470 นาโนเมตร, ตั้งค่าศูนย์ด้วยการกลั่น
2. Place Reagent I, Reagent II and Reagent III at 37℃ (สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม) หรือ 25 ℃(สายพันธุ์อื่น) สำหรับ 10 minutes before
3. เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:

Name of reagent (ไมโครลิตร)	หลอดทดลอง
ตัวอย่าง	15
น้ำกลั่น	270
รีเอเจนต์ I	520
รีเอเจนต์ II	130
รีเอเจนต์ III	135

The above reagents are added into 1 mL glass cuvette in sequence, immediately mixed and timed. The absorbance values A1 for 30 s and A2 for 90s at 470 nm are recorded, ΔA＝A2-A1.

สาม. การคำนวณ

ฉัน. เซรั่ม (พลาสมา)ตัวอย่าง

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the absorbance of 0.01 change at 470 nm in the reaction system per minute every milliliter of serum (พลาสมา).

พ็อด(ยู/มล)=ΔA×Vrv÷Vsv÷0.01÷T =7133×ΔA

ครั้งที่สอง. เนื้อเยื่อ, bacteria or culture cells

ก. ความเข้มข้นของโปรตีน

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the absorbance of 0.01 change at 470 nm in the reaction system per minute every milligram protein.

พ็อด(U/มก)＝ΔA×Vrv÷(Vsv×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

บี. น้ำหนักตัวอย่าง

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the absorbance of 0.01 change at 470 nm in the reaction system per minute every gram tissue.

พ็อด(น้ำหนักสด U/G)＝ΔA×Vrv÷(W× Vsv÷Vs)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

ค. เซลลาเมาท์

คำจำกัดความของหน่วย: One unit of enzyme activity is defined as the amount of enzyme catalyzes the absorbance of 0.01 change at 470 nm in the reaction system per minute every 10 thousand bacteria or cells.

พ็อด(เซลล์ U/104)＝ΔA×Vrv÷(500×Vsv÷Vs)÷0.01÷T =14.27×ΔA

เชือก: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 1.07 มล; เทียบกับ: ปริมาตรส่วนเกิน, 0.015 มล; เทียบกับ: สารสกัดสารละลาย, 1 มล;

ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา, 1 นาที;

ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;

500: จำนวนแบคทีเรียหรือเซลล์ทั้งหมด, 5 ล้าน.

บันทึก:

1. If there are many samples to be determined at one time, the mixture of Reagent I, ครั้งที่สอง, III and distilled water can be prepared in proportion, and the mixture can be placed at 37℃ (mammalian) หรือ 25 ℃ (สายพันธุ์อื่น) for more than 10 นาที. 15 ไมโครลิตรของตัวอย่างและ 1055 μL of mixture can be added for determination.
2. If ΔA is less than 0.005, the reaction time can be extended to 5 นาที. If ΔA is greater than 0.5 or there are more bubbles in the reaction solution, the sample can be diluted with the extract and determined, and the calculation formula is multiplied by the corresponding dilution.
   

   อ้างอิง

   • Reuveni R . Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon ( Cucumis melo ) to Pseudoperonospora cubensis[เจ]. Phytopathology, 1992,82(7).
   • Doerge D R , Divi R L , Churchwell M I . Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[เจ]. ชีวเคมีวิเคราะห์, 1997,250(1):10-17.

   สินค้าที่เกี่ยวข้อง

   BC0190/BC0195 โพลีฟีนอลออกซิเดส (ป.ป.ช) Activity Assay Kit BC0210/BC0215 Phenylalanine Ammonia Lyase (เพื่อน) Activity Assay Kit BC0170/BC0175 Superoxide Dismutase (เอสโอดี) Activity Assay Kit BC0200/BC0205 Catalase (แมว) ชุดทดสอบกิจกรรม