มาลอนไดอัลดีไฮด์ (ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ) ชุดทดสอบเนื้อหา
บันทึก: มีความจำเป็นต้องคาดการณ์ 2-3 ตัวอย่างที่แตกต่างกันมากก่อนการพิจารณาอย่างเป็นทางการ. อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์.
หมายเลขแมว: BC0020
ขนาด: 50ที/48ส
ส่วนประกอบ:
| ส่วนประกอบ | พิมพ์ | ปริมาณ/ปริมาณ | พื้นที่จัดเก็บ |
|---|---|---|---|
| รีเอเจนต์การสกัด | ของเหลว | 60 มล. × 1 | 4องศาเซลเซียส |
| รีเอเจนต์ I | ของเหลว | 42 มล. × 1 | 4องศาเซลเซียส |
| รีเอเจนต์ II | ผง | – | 4องศาเซลเซียส |
| รีเอเจนต์การทำงานของ MDA | ของเหลว | 20 มล. รีเอเจนต์ I | 4องศาเซลเซียส |
| + รีเอเจนต์ II | |||
| รีเอเจนต์ III | ของเหลว | 12 มล. × 1 | 4องศาเซลเซียส |
บันทึก: โซลูชันการทำงานสำหรับการตรวจจับ MDA นั้นละลายได้ยาก, ซึ่งสามารถให้ความร้อนได้ที่ 70 ℃ และสั่นสะเทือนอย่างรุนแรงเพื่อส่งเสริมการละลาย. หรือโดยการรักษาด้วยอัลตราโซนิกเพื่อส่งเสริมการละลาย.
รายละเอียดสินค้า:
- ลิพิดเปอร์ออกไซด์เกิดขึ้นจากปฏิกิริยาระหว่างอนุมูลอิสระกับกรดไขมันไม่อิ่มตัว, ในที่สุดก็กลายเป็นสารประกอบ เช่น มาลอนไดอัลดีไฮด์ (ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ). ระดับของการเกิดออกซิเดชันของไขมันทำหน้าที่เป็นตัวบ่งชี้, ซึ่งสามารถประเมินได้โดยการวัดระดับ MDA.
- ภายใต้สภาวะที่เป็นกรดและอุณหภูมิสูง, สารประกอบสีน้ำตาลแดง, 3,5,5-เมทิลซัลฟาเมทอกซาโซล-2,4-สองคีโตนสามตัว, ถูกสังเคราะห์ผ่านปฏิกิริยาควบแน่นระหว่าง MDA และกรดไทโอบาร์บิทูริก (จะแจ้งภายหลัง). สารประกอบนี้แสดงการดูดซึมสูงสุดที่ 532 นาโนเมตร. การประเมินการเกิดออกซิเดชันของไขมันเกี่ยวข้องกับการวิเคราะห์สี. อย่างไรก็ตาม, การมีน้ำตาลที่ละลายน้ำได้อาจรบกวนกระบวนการตรวจจับได้. ปฏิกิริยาของน้ำตาลที่ละลายน้ำได้กับ TBA ทำให้เกิดปฏิกิริยาสีโดยมีความยาวคลื่นในการดูดกลืนที่ 450 นาโนเมตรและ 532 นาโนเมตร. ในชุดตรวจนี้, ปริมาณ MDA ถูกกำหนดโดยความแปรปรวนในการดูดกลืนแสงที่ 532 นาโนเมตร, 450 นาโนเมตร, และ 600 นาโนเมตร.
- เนื่องจากการมีอยู่ของซูโครสในเนื้อเยื่อพืชและกลูโคสในเนื้อเยื่อของสัตว์, ชุดนี้ประกอบด้วยสูตรคำนวณสองสูตรที่ออกแบบมาสำหรับซูโครสและกลูโคสโดยเฉพาะ. สูตรเหล่านี้เหมาะสำหรับการประเมินไขมัน.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:
สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, อ่างอาบน้ำ, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตโอน,1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล, ปูน/โฮโมจีไนเซอร์, น้ำแข็งและน้ำกลั่น.
ขั้นตอน:
ฉัน. การจัดเตรียมตัวอย่าง:
แบคทีเรียหรือเซลล์:
รวบรวมแบคทีเรียหรือเซลล์ลงในหลอดหมุนเหวี่ยง. 5 สามารถผสมแบคทีเรียหรือเซลล์นับล้านได้ 1 มิลลิลิตรของรีเอเจนต์การสกัด. ใช้อัลตราโซนิกเพื่อแยกแบคทีเรียและเซลล์ (วางบนน้ำแข็ง, กำลังอัลตราโซนิก 200W, เวลาล้ำเสียง 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 ×กรัม สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃ เพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ, และนำส่วนเหนือตะกอนบนน้ำแข็งก่อนทำการทดสอบ.
เนื้อเยื่อ:
0.1 สามารถผสมเนื้อเยื่อกรัมได้ 1 รีเอเจนต์สำหรับการสกัด มล. และถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยสมบูรณ์บนอ่างน้ำแข็ง. จากนั้นปั่นแยกที่ 8000 ×กรัม สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃ เพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ, และนำส่วนเหนือตะกอนไปบนน้ำแข็งก่อนทำการทดสอบ.
เซรั่ม:
ตรวจจับ
ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:
- เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ให้ร้อนนานกว่า 30 นาที, ตั้งค่าศูนย์ด้วยการกลั่น
- เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:
| รีเอเจนต์ (ไมโครลิตร) | หลอดทดลอง (ต) | หลอดเปล่า (บี) |
| รีเอเจนต์การทำงานของ MDA | 600 | 600 |
| ตัวอย่าง | 200 | – |
| น้ำกลั่น | – | 200 |
| รีเอเจนต์ Ⅲ | 200 | 200 |
ส่วนผสมจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 100°C เป็นเวลา 60 นาที (ปิดสนิทเพื่อป้องกันการสูญเสียความชื้น), ระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง, และปั่นเหวี่ยงที่ 10000 ×กรัม สำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ. เอาส่วนเหนือตะกอนเข้าไป 1 คิวเวตต์แก้วขนาดมล, และวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตร, 532 นาโนเมตรและ 600 นาโนเมตร.
∆A450=A450(ต)-A450(บี), ∆A532=A532(ต)-A532(บี), ∆A600 =A600(ต)-A600(บี). หลอดเปล่าต้องทดสอบครั้งหรือสองครั้ง.
สาม. การคำนวณ:
- เนื้อเยื่อ, แบคทีเรียหรือเซลล์เพาะเลี้ยง
- ความเข้มข้นของโปรตีน:
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (โปรโตซัว nmol/mg)-(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)×วีอาร์วี۞(ซีพีอาร์×เทียบกับ)
=5×(6.45×(∆A532-∆A600)-1.29×∆A450)__ซีพีอาร์
- น้ำหนักตัวอย่าง:
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (น้ำหนักนาโนโมล/กรัม)-( 6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)×วีอาร์วี۞(W × Vs ۞ Vsv)
=5×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)۞W
- เซลลาเมาท์:
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (นาโนโมล/104เซลล์)-( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 1.29×A∆450)×วีอาร์วี۞(400×Vs۞Vsv)
=0.01×(6.45×(∆A532-∆A600)- 1.29×∆A450)
- เซรั่ม:
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (นาโนโมล/มล)-(6.45×(∆A532 - ∆A600)-1.29×∆A450)×Vrv۞Vs
=5×(6.45×(∆A532 - ∆A600)-1.29×∆A450)
- เนื้อเยื่อพืช:
- น้ำหนักตัวอย่าง
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (น้ำหนักนาโนโมล/กรัม)- (6.45×(∆A532-∆A600)-0.56×∆A450)×วีอาร์วี۞(W × Vs ۞ Vsv)
=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)۞W
- ความเข้มข้นของโปรตีน:
ภาคตะวันออกเฉียงเหนือ (โปรโตซัว nmol/mg)-( 6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)×วีอาร์วี۞(ซีพีอาร์×เทียบกับ)
=5×(6.45 ×(∆A532-∆A600)- 0.56×∆A450)__ซีพีอาร์
เชือก: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 1 มล; เทียบกับ: ปริมาณตัวอย่าง, 0.2 มล;
เทียบกับ: ปริมาณการสกัด, 1 มล;
ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;
400: จำนวนแบคทีเรียและเซลล์ทั้งหมด, 5 ล้าน.
บันทึก:
หากพบว่าค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างต่ำเกินไป, สามารถปรับเวลาอาบน้ำเดือดได้จาก 60 นาทีถึง 90 นาทีหรือนานกว่านั้น. การตรวจจับ MDA ในการทดลองเดียวกันจะต้องขยายออกไปในเวลาเดียวกันเพื่อหลีกเลี่ยงข้อผิดพลาด.
อ้างอิง
- สปิตซ์ ดี.อาร์, โอเบอร์ลีย์ แอล ดับเบิลยู. การทดสอบฤทธิ์ของซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตสในเนื้อเยื่อที่เป็นเนื้อเดียวกันของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม[เจ]. ชีวเคมีวิเคราะห์,1989
- มาซายาสุ เอ็ม, ฮิโรชิ วาย. วิธีตรวจวิเคราะห์กิจกรรมซูเปอร์ออกไซด์ดิสมิวเตสแบบง่ายสำหรับการใช้งานทางคลินิก[เจ]. คลินิกเคมี
สินค้าที่เกี่ยวข้อง:
BC3590/BC3595 ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ชุดทดสอบเนื้อหา
BC1090/BC1095 แซนทีนออกซิเดส (XOD) ชุดทดสอบกิจกรรม
BC0690/BC0695 กลูโคสออกซิเดส (พระเจ้า) ชุดทดสอบกิจกรรม BC1270/BC1275 ชุดทดสอบปริมาณโปรตีนคาร์บอนิล BC1280/BC1285 ไดเอมีนออกซิเดส (ดีเอโอ) ชุดทดสอบกิจกรรม BC1290/BC1295 ชุดทดสอบปริมาณไอออนของซูเปอร์ออกไซด์
ลูกค้า’ บทวิจารณ์ผลิตภัณฑ์ Solarbio สำหรับการอ้างอิง
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์