โซลาบิโอ ไฮดรอกซีโพรลีน (ไฮป์) ชุดทดสอบกิจกรรม

ไฮดรอกซีโพรลีน (ไฮป์) ชุดทดสอบกิจกรรม

บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.

อุปกรณ์ตรวจจับ: เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท

หมายเลขแมว: BC0255

ขนาด: 100ที/96ส

 

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: 6 โมล/ลิตร กรดไฮโดรคลอริก (เอชซีแอล), รีเอเจนต์ที่จัดหาเอง. HCl เข้มข้น ( 37%) : น้ำ(วี/วี) =1:1, เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง.

รีเอเจนต์ I: 8 มล.×1, เก็บที่อุณหภูมิ 4°C และป้องกันแสง. รีเอเจนต์ II: 8 มล.×1, เก็บที่อุณหภูมิ 4°C และป้องกันแสง. มาตรฐาน: 0.5 มล.×1, 0.5 มก./มล. ไฮดรอกซีโพรลีน, เก็บที่อุณหภูมิ 4 ℃.

คำอธิบาย:

HYP เป็นหนึ่งในองค์ประกอบหลักของคอลลาเจนในร่างกาย. คอลลาเจนส่วนใหญ่กระจายอยู่ในผิวหนัง, เส้นเอ็น, กระดูกอ่อน, และหลอดเลือด ฯลฯ. ดังนั้น, เนื้อหาของ HYP เป็นดัชนีสำคัญที่สะท้อนถึงระดับการเผาผลาญและการเกิดพังผืดของเนื้อเยื่อคอลลาเจน.

ตัวอย่างจะถูกไฮโดรไลซ์เพื่อผลิต HYP อิสระ, ซึ่งถูกออกซิไดซ์เพิ่มเติมโดยคลอรามีน T. ผลิตภัณฑ์ที่ถูกออกซิไดซ์ทำปฏิกิริยากับ p-Dimethylaminobenzaldehyde เพื่อผลิตสารประกอบสีแดงที่มีคุณลักษณะการดูดซับสูงสุดที่ 560 นาโนเมตร. ปริมาณของ HYP สามารถคำนวณได้โดยการวัดค่าการดูดซึมของตัวอย่างไฮโดรไลเสตที่ 560 นาโนเมตร.

จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:

ตาชั่ง, เตาอบ, หลอดแก้ว, เครื่องหมุนเหวี่ยง, อ่างอาบน้ำ, เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลท, คิวเวตต์แก้วขนาดเล็ก/จาน 96 หลุม, 6 โมล/ลิตร HCl และน้ำกลั่น.

ขั้นตอน:

ฉัน. การจัดเตรียมตัวอย่าง

1. 1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:

ชั่งน้ำหนักประมาณ 0.2 กรัมของตัวอย่างลงในหลอดแก้ว, ตัดเนื้อเยื่อเป็นชิ้น ๆ ให้มากที่สุดเพื่อการย่อยอาหาร. เพิ่ม 2 มล. ของสารละลายสารสกัดและฝาปิดหลวมเล็กน้อยและไม่กันลม, ต้มหรืออบในเตาอบ 110°C 2 ถึง 6 ชั่วโมงในการย่อยจนไม่เห็นก้อนใหญ่.

หลังจากระบายความร้อนแล้ว, ปรับ pH ไปที่ 6-8 กับ 10 โมล/ลิตร NaOH (อย่าให้กรดหรือด่างมากเกินไป) จากนั้นให้ปริมาตรคงที่เป็น 4 มล. ด้วยน้ำกลั่น. การหมุนเหวี่ยงที่ 16000 รอบต่อนาทีสำหรับ 20 นาทีที่ 25 ℃ (หากยังมีสิ่งเจือปนหลังจากการปั่นแยก, สามารถลบออกได้โดยการกรอง).

นำส่วนเหนือตะกอนไปทดสอบ. (อาจเกิดสารสีดำขึ้นได้ในระหว่างกระบวนการ, และหากไม่สามารถย่อยได้เป็นเวลานาน, อาจเป็นสารคาร์บอไนซ์. ไม่ส่งผลกระทบต่อการทดลอง).

2. เซลล์:

เอา 5 ล้านเซลล์, เพิ่ม 1 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด, ต้ม, หรืออบที่อุณหภูมิ 110°C เป็นเวลา 2 ถึง 6 ชั่วโมงในการย่อยให้อยู่ในสถานะโปร่งใส.

หลังจากระบายความร้อนแล้ว, ปรับ pH ไปที่ 6-8 กับ 10 โมล/ลิตร NaOH (อย่าให้กรดหรือด่างมากเกินไป) จากนั้นให้ปริมาตรคงที่เป็น 2 มล. ด้วยน้ำกลั่น. การหมุนเหวี่ยงที่ 16000 รอบต่อนาทีสำหรับ 20 นาทีที่ 25 ℃ (หากยังมีสิ่งเจือปนหลังจากการปั่นแยก, สามารถลบออกได้โดยการกรอง).

นำส่วนเหนือตะกอนไปทดสอบ.

ครั้งที่สอง. การตรวจจับ

1. เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลทสำหรับ 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 560 nm และตั้งค่าเป็นศูนย์ด้วยการกลั่น
2. เจือจางสารละลายมาตรฐานเป็น 30, 15, 7.5, 3.75, 1.875, 0.938, 0.469, 0.234 มก./มล.
3. เพิ่มรีเอเจนต์ตามตารางต่อไปนี้.

รีเอเจนต์ (ไมโครลิตร)	หลอดเปล่า (บี)	หลอดทดลอง (ต)	หลอดมาตรฐาน (ส)
ตัวอย่าง	–	60	–
มาตรฐาน	–	–	60
รีเอเจนต์ I	60	60	60
ผสมให้เข้ากันแล้วทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที.
รีเอเจนต์ II	60	60	60
น้ำกลั่น	180	120	120

ผสมให้เข้ากัน, ฟักที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 20 นาที, ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที, นำสารละลายปฏิกิริยา 200μL ลงในคิวเวตต์แก้วขนาดเล็ก/แผ่นก้นแบน 96 หลุม และทดสอบค่าการดูดกลืนแสงที่ 560 นาโนเมตร. ∆A = AT – เอบี.

สาม. การคำนวณ

1. การทำมาตรฐาน

เมื่อทำโค้งมาตรฐาน, ความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐานถือเป็นแกน x, และ ∆AS (∆AS =AS-AB) จะถูกนำมาเป็นแกน y. จะได้สมการเชิงเส้น y=kx+b. ใช้ ∆AT (AT-AB) สู่สมการเพื่อให้ได้ x.

2. การคำนวณเนื้อหาไฮดรอกซีโพรลีน:คำนวณตามน้ำหนักสดของตัวอย่าง:

เนื้อหาไฮดรอกซีโพรลีนของเนื้อเยื่อ (ไมโครกรัมต่อกรัมของน้ำหนักสด) = x×VS÷(W×VS۞VTE) = 4x۞W.

• คำนวณตามความเข้มข้นของโปรตีนตัวอย่าง:

เนื้อหาไฮดรอกซีโพรลีนของเนื้อเยื่อ (ไมโครกรัม/มิลลิกรัมโปรต) = x×VS÷(ซีพีอาร์×VS) = x÷Cpr.

• คำนวณตามจำนวนออร์เซลล์ของแบคทีเรีย:

ปริมาณไฮดรอกซีโพรลีนของเซลล์ (ไมโครกรัม/104 เซลล์) = x×VS÷(N×VS۞VCE )= 2x÷น.

VS: ปริมาณตัวอย่างที่เพิ่ม, 0.06 มล;

วีทีอี: ปริมาณสารละลายสารสกัดเนื้อเยื่อ, 4 มล; วีซีอี: ปริมาตรของสารละลายสกัดเซลล์, 2 มล;

ว: น้ำหนักสดของตัวอย่าง, ก;

เอ็น: จำนวนเซลล์,104 เป็นหน่วย, 10000;

ซีพีอาร์: ความเข้มข้นของโปรตีนตัวอย่าง, มก./มล.

บันทึก

1. หากค่า OD มากกว่า 1.0, ควรเจือจางตัวอย่างอย่างเหมาะสมแล้วจึงพิจารณา. ให้ความสนใจกับการคูณตัวคูณการเจือจางในสูตรการคำนวณ.
2. รีเอเจนต์มีความเป็นพิษบางประการ. โปรดใช้มาตรการป้องกันระหว่างการใช้งานเพื่อป้องกันการสูดดมหรือสัมผัสกับผิวหนัง.
3. เมื่อคำนวณตามความเข้มข้นของโปรตีนตัวอย่าง, โปรตีนในตัวอย่างจะต้องแยกจากกันและพิจารณา.

ตัวอย่างการทดลอง

• 0.2นำขาหนูจำนวนกรัมไปบำบัดตัวอย่าง, และส่วนเหนือตะกอนจะถูกนำออกมาและดำเนินการตามขั้นตอนการกำหนด. ∆A =AT-AB = 0.177-0.06 - 0.117 วัดโดย 96 จานดี, และเส้นโค้งมาตรฐาน y = 0.0383x + 0.022 ถูกนำเข้ามา, และ x = 2.48 เป็น

เนื้อหาของไฮดรอกซีโพรลีนในเนื้อเยื่อ (มวลไมโครกรัม/กรัม) = 4x ​​۞ W = 4 × 2.48 ÷ 0.2 - 49.6 มวลไมโครกรัม/กรัม.

การอ้างอิงผลิตภัณฑ์ล่าสุด

• ลี่ตง ฟาน,เจียชิง เฉิน,หยานเหมิงเต๋า,และคณะ. การเพิ่มประสิทธิภาพของการสร้างความแตกต่างของกระดูกอ่อนของเซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคม์และการซ่อมแซมกระดูกอ่อนโดยเกรลิน. วารสารวิจัยกระดูกและข้อ. มกราคม 2019;(IF3.043)

สินค้าที่เกี่ยวข้อง

BC1550/BC1555 กลูตามิก-ไพรูวิก ทรานซามิเนส (GPT) ชุดวิเคราะห์กิจกรรม BC1560/BC1565 ทรานซามิเนสกลูตามิก-ออกซาอะซิติก (ได้รับ) ชุดทดสอบกิจกรรม BC0290/BC0295 Proline (มือโปร) ชุดทดสอบเนื้อหา

BC1570/BC1575 กรดอะมิโน (เอเอ) ชุดทดสอบเนื้อหา BC0180/BC0185 ซิสเทอีน (ซิส) ชุดทดสอบเนื้อหา BC1580/BC1585 กรดกลูตามิก (กลู) ชุดทดสอบเนื้อหา

ข้อกำหนดทางเทคนิค:

ขีดจำกัดการตรวจจับ: 0.057 มก./มล

ช่วงเชิงเส้น: 0.117-30 มก./มล