Solarbio Cell Iron Content Assay Kit 50T | 48ส

Cell Iron Content Assay Kit

บันทึก: มีความจำเป็นต้องคาดการณ์ 2-3 ตัวอย่างที่แตกต่างกันมากก่อนการพิจารณาอย่างเป็นทางการ. อุปกรณ์การดำเนินงาน: สเปกโตรโฟโตมิเตอร์

หมายเลขแมว: BC5310

ขนาด:50ที/48ส

ส่วนประกอบ:

สารสกัดโซลูชั่น: ของเหลว 30 มล.×1. เก็บที่ 2-8 ℃.

รีเอเจนต์ I: ของเหลว 15 มล.×1. เก็บที่ 2-8 ℃. รีเอเจนต์ II: ของเหลว 35 มล.×1. เก็บที่ 2-8 ℃. รีเอเจนต์ III: ของเหลว 6 มล.×1. เก็บที่ 2-8 ℃.

มาตรฐาน: ของเหลว 1 มล.×1. เก็บที่ 2-8 ℃. 1 μmol/mL of Fe3+ standard solution. Add 200μL distilled water to 200μL Fe3+ standard solution of 1 μmol/mL before use, and mix well to form the Fe3+ standard solution of 0.5 ไมโครโมล/มล.

รายละเอียดสินค้า:

Iron is one of the essential trace elements in the human body, which is the main component of hemoglobin, myoglobin, cytochrome, and other enzyme systems. Iron can assist in the transport of oxygen and promote fat oxidation. Iron deficiency can easily cause anemia, and metabolic disorders, and affect the immune function of the body.

Fe3+ is reduced by hydroxylamine hydrochloride to Fe2+. Fe2+ could react with Phenanthroline Monohydrate to form a kind of orange compound under weak acid conditions, which has an absorption peak at 510 นาโนเมตร. According to the measure, absorbance at 520 nm can reflect cell iron concentration.

รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้:

สเปกโตรโฟโตมิเตอร์, เครื่องหมุนเหวี่ยงบนโต๊ะ, ปิเปตแบบปรับได้, 1คิวเวตต์แก้วขนาดมล, cell ultrasonic crusher, น้ำแข็ง, น้ำกลั่น.

ขั้นตอน:

1. การจัดเตรียมตัวอย่าง:
2. รวบรวมแบคทีเรียหรือเซลล์ลงในหลอดหมุนเหวี่ยง, and discard the supernatant after centrifugation. According to the proportion of bacteria or cell number (104): สารสกัดสารละลาย (มล) ของ 500-1000-1 เพื่อสกัด. ก็มีข้อเสนอแนะว่า 5 million bacteria or cells amount to 0.5mL of Extract solution. Split the bacteria or cell with ultrasonication (วางบนน้ำแข็ง, กำลังอัลตราโซนิก 200W, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 7 วินาที, ทำซ้ำ 30 ครั้ง). เครื่องปั่นแยกที่ 8000 กรัมสำหรับ 10 นาทีที่ 4 ℃ เพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ, and take the supernatant on ice before
3. Ultrasonication working time could be prolonged properly if samples are fungi, แบคทีเรีย, or other microorganisms with cell

ครั้งที่สอง. การกำหนด ขั้นตอน:

1. เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ก่อน 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 510 นาโนเมตร, and set zero with distilled
2. Add reagents with the following:

รีเอเจนต์ (ไมโครลิตร)	หลอดทดลอง (ที่)	หลอดเปล่า (เอบี)	หลอดมาตรฐาน (เช่น)
ตัวอย่าง	100	–	–
น้ำกลั่น	–	100	–
โซลูชั่นมาตรฐาน (0.5 ไมโครโมล/มล)	–	–	100
รีเอเจนต์ I	200	200	200
รีเอเจนต์ Ⅱ	600	600	600
รีเอเจนต์ Ⅲ	100	100	100
ผสมให้เข้ากัน, and place at 25℃ for 10 นาที. Take 1mL of reaction solution in 1mL glass cuvette. วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 510 นาโนเมตร, recorded as AT, เอบี, and AS. ΔAT = AT-AB, ΔAS=AS-AB. Blank tubes and standard tubes only need to be tested once or twice.

สาม. Cell Iron Content การคำนวณ

• Bacteria/cells number

Cell iron content (ng/104 cell) -(Cs×ΔAT÷ΔAS)×VE×103×55.845÷500=27.922×ΔAT÷ΔAS

2) โปรตีน ความเข้มข้น

Cell iron content (ng/mg prot)

-(Cs×ΔAT÷ΔAS)×VE×103×55.845÷(Cpr×VE)=27922.5×ΔAT÷ΔAS÷Cpr

คส: Concentration of Fe3+ standard solution, 0.5ไมโครโมล/มล;

VE: สารสกัดสารละลาย, 0.5 มล;

103: Unit conversion factor, 1 μmol=103 nmol;

55.845: Relative molecular mass of Fe, 55.845ng/nmol; 500: จำนวนแบคทีเรียหรือเซลล์ทั้งหมด, 5 ล้าน;

ซีพีอาร์: ความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล.

บันทึก:

1. If ΔAT＜01, it is recommended to increase the sample supernatant size before determination. If AT＞1, it is recommended to dilute the sample supernatant with distilled water before determination. And modify the calculation formula.
2. Sample supernatant protein concentration needs to be measured by yourself if cell iron content is calculated by protein

ตัวอย่างการทดลอง:

1. เอา 5 ล้านเซลล์, เพิ่ม 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายสารสกัด, and split with ultrasonication. Centrifuge and take the supernatant. Then operate according to the determination steps, calculate ΔAT=AT-AB= 0.171- 0.000=0.171, ΔAS=AS-AB=0.573-0.000=0.573. The result is calculated according to cell numbers: Cell iron content (ng/104 cells) =27.922×ΔAT÷ΔAS=8.333ng/104 cell

สินค้าที่เกี่ยวข้อง：

BC1730/BC1735 Serum Ferri Ion Content Assay Kit

BC2860/BC2865 ความสามารถในการผูกเหล็กทั้งหมด(TIBC) ชุดทดสอบ

BC4350/BC4355 Tissue Iron Content Assay Kit