ชุดทดสอบเนื้อหาอัลบูมินของ Solarbio (การวัดสีสีเขียวของโบรโมเครโซล)

ภาพรวมผลิตภัณฑ์

ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์

การเตรียมสารละลาย:

1. โซลูชั่นการพัฒนาสี:
   • เตรียมสารละลายพัฒนาสีตามจำนวนตัวอย่างโดยการผสมรีเอเจนต์วัน, รีเอเจนต์สอง, และรีเอเจนต์สามในอัตราส่วน 10μL: 990ไมโครลิตร: 10ไมโครลิตร (1010ไมโครลิตรสำหรับ 5 การทดสอบ). ผสมให้เข้ากันแล้วนำไปใช้ทันที.
2. โซลูชั่นมาตรฐาน:
   • เตรียมก 10 สารละลายมาตรฐานอัลบูมิน มก./มล. ก่อนใช้งาน, ใช้200μLของ 10 สารละลายมาตรฐานอัลบูมิน มก./มล. และเติมสารละลายสกัด 200μL เพื่อเตรียม 5 สารละลายมาตรฐานอัลบูมิน มก./มล. ผสมให้เข้ากันแล้วนำไปใช้ทันที.

รายละเอียดสินค้า:

• อัลบูมิน:
  • ตับสังเคราะห์โปรตีนหลักในพลาสมาของมนุษย์.
  • สารอาหารสำคัญที่ช่วยรักษาแรงดันออสโมติกในพลาสมา.
  • เกาะติดกับสารอาหารต่างๆ, ฮอร์โมน, และยาเสพติด.
  • สะท้อนถึงภาวะโภชนาการของร่างกาย.
  • ใช้ในการคัดกรองโรคที่ส่งผลต่อการทำงานของตับ (เช่น., โรคตับแข็ง, ความเสียหายของตับ, ภาวะทุพโภชนาการ, เนื้องอกร้าย).
• วิธีการตรวจจับ:
  • มีค่าพีเอช 4.2 สารละลายบัฟเฟอร์, เซรั่มอัลบูมินมีประจุบวก.
  • เมื่อมีสารลดแรงตึงผิวที่ไม่มีไอออนิกอยู่, อัลบูมินจับกับสีย้อม Bromocresol Green ที่มีประจุลบ.
  • ก่อตัวเป็นคอมเพล็กซ์สีน้ำเงินเขียว.
  • สารเชิงซ้อนนี้มีค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ความยาวคลื่นเท่ากับ 630 นาโนเมตร.
  • ความเข้มของสีเป็นสัดส่วนโดยตรงกับความเข้มข้นของอัลบูมิน.
• ปฏิกิริยา:
  • อัลบูมิน + โบรโมเครโซล กรีน → คอมเพล็กซ์สีน้ำเงิน-เขียว (630 นาโนเมตร)

บันทึก:

• ก่อนทำการทดลอง, กำลังเลือก 2-3 แนะนำให้ใช้ตัวอย่างที่คาดว่าจะมีความแตกต่างกันมากเพื่อทำการทดลองเบื้องต้น.
• หากค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างไม่อยู่ในช่วงการวัด, แนะนำให้เจือจางหรือเพิ่มปริมาตรตัวอย่างเพื่อการตรวจจับ.

เครื่องมือและวัสดุที่จำเป็น (เพื่อเตรียมพร้อม):

• เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์/เครื่องอ่านไมโครเพลทที่มองเห็นได้
• เครื่องหมุนเหวี่ยงอุณหภูมิต่ำ
• ความสมดุลเชิงวิเคราะห์
• คิวเวตแก้วไมโคร/เพลต 96 หลุม
• ปิเปตแบบปรับได้
• ปูน/โฮโมจีไนเซอร์/ตัวทำลายเซลล์อัลตราโซนิก
• น้ำแข็งและน้ำกลั่น

ขั้นตอน:

การประมวลผลตัวอย่าง (สามารถปรับปริมาตรตัวอย่างได้ตามความเหมาะสม; อัตราส่วนเฉพาะสามารถอ้างอิงได้จากวรรณกรรม):

1. ตัวอย่างเนื้อเยื่อ:
   • เติมสารละลายสกัดตามอัตราส่วนมวลตัวอย่าง (ก) ถึงปริมาตรสารละลายในการสกัด (มล) ของ 1:5~10 (แนะนำให้ชั่งน้ำหนักตัวอย่าง 0.1 กรัม และเติมสารละลายสำหรับสกัด 1.0 มล).
   • ทำให้ตัวอย่างเป็นเนื้อเดียวกันในอ่างน้ำแข็ง, จากนั้นปั่นแยกที่ 4 ℃, 8000กรัมสำหรับ 10 นาที.
   • ทิ้งเม็ดและเก็บส่วนเหนือตะกอนไว้บนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
2. ตัวอย่างแบคทีเรีย/เซลล์:
   • เติมสารละลายสกัดตามสัดส่วนจำนวนแบคทีเรีย/เซลล์ (10^6) ถึงปริมาตรสารละลายในการสกัด (มล) ของ 5~10:1 (แนะนำให้เติมสารละลายสกัด 1.0 มล. ลงไป 5 ล้านแบคทีเรีย/เซลล์).
   • ทำลายแบคทีเรีย/เซลล์ในอ่างน้ำแข็งโดยใช้เครื่องทำลายเซลล์อัลตราโซนิก (กำลังไฟ 200W, อัลตราโซนิกเป็นเวลา 3 วินาที, ช่วงเวลา 7 วินาที, เวลาทั้งหมด 5 นาที).
   • เครื่องปั่นแยกที่ 4 ℃, 8000กรัมสำหรับ 10 นาที.
   • ทิ้งเม็ดและเก็บส่วนเหนือตะกอนไว้บนน้ำแข็งเพื่อทำการทดสอบ.
3. ตัวอย่างของเหลว:
   • วัดโดยตรง.
   • หากของเหลวขุ่น, หมุนเหวี่ยงและใช้ส่วนเหนือตะกอนในการวัด.

1. การเตรียมเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบมองเห็น/เครื่องอ่านไมโครเพลท:
   • เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบมองเห็น/เครื่องอ่านไมโครเพลทอย่างน้อยที่สุด 30 นาที.
   • ตั้งค่าความยาวคลื่นเป็น 630 นาโนเมตร.
   • ทำให้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ที่มองเห็นเป็นศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
2. ตารางปฏิบัติการ (เพิ่มรีเอเจนต์ต่อไปนี้ลงในคิวเวตต์แก้วขนาดเล็ก/เพลต 96 หลุม):

• ผสมให้เข้ากันและพักไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 วินาที.
• วัดค่าการดูดกลืนแสงของแต่ละหลอดได้ที่ 630 นาโนเมตร, บันทึกค่าเป็น A_test, A_มาตรฐาน, และ A_blank.
• คำนวณ ΔA_test = A_test – A_ว่างเปล่า, และ ΔA_standard = A_standard – A_ว่างเปล่า.
• โปรดทราบว่าจำเป็นต้องวัดเฉพาะท่อเปล่าและท่อมาตรฐานเท่านั้น 1-2 ครั้ง.

บันทึก: ระยะเวลายืนหยัดอาจส่งผลต่อผลการตรวจจับ. ขอแนะนำให้ทำปฏิกิริยาโดยตรงในคิวเวตต์แก้วขนาดเล็ก/เพลต 96 หลุม 20 วินาทีแล้วจึงวัดค่าการดูดกลืนแสง.

การคำนวณเนื้อหาอัลบูมิน

1. การคำนวณตามความเข้มข้นของโปรตีนตัวอย่าง

เนื้อหาอัลบูมิน (มก./มก. โปรต) = ΔA ที่วัดได้ × (มาตรฐาน C ÷ ΔAมาตรฐาน) × V ตัวอย่าง ۞ (ตัวอย่าง V × Cpr) - 5 × ΔA วัดได้ ۞ ΔA มาตรฐาน ۞ Cpr

2. คำนวณโดยมวลตัวอย่าง

เนื้อหาอัลบูมิน (มวลมิลลิกรัม/กรัม) = ΔA ที่วัดได้ × (มาตรฐาน C ÷ ΔAมาตรฐาน) × V ตัวอย่าง ۞ (ตัวอย่าง W × V ÷ ผลรวมตัวอย่าง V) - 5 × ΔA วัดได้ ۞ ΔA มาตรฐาน ۞ W

3. คำนวณตามจำนวนแบคทีเรีย/เซลล์

เนื้อหาอัลบูมิน (มก./10^6 เซลล์) = ΔA ที่วัดได้ × (มาตรฐาน C ÷ ΔAมาตรฐาน) × V ตัวอย่าง ۞ (ตัวอย่าง V × N ÷ ผลรวมตัวอย่าง V) - 5 × ΔA วัดได้ ۞ ΔA มาตรฐาน ۞ N

4. การคำนวณตามปริมาตรของเหลว

เนื้อหาอัลบูมิน (มก./มล) = ΔA ที่วัดได้ × (มาตรฐาน C ÷ ΔAมาตรฐาน) × V ตัวอย่าง เสี่ยว V ตัวอย่าง = 5 × ∆A วัดได้ ∆ ∆A มาตรฐาน

คำจำกัดความ:

• มาตรฐานซี: ความเข้มข้นของหลอดมาตรฐาน, 5 มก./มล;
• วีตัวอย่าง: เพิ่มปริมาณตัวอย่างแล้ว, 0.02มล;
• รวมตัวอย่าง V: เพิ่มปริมาณสารสกัดทั้งหมด, 1มล;
• ซีพีอาร์: ตัวอย่างความเข้มข้นของโปรตีน, มก./มล;
• ว: มวลตัวอย่าง, ก;
• เอ็น: จำนวนแบคทีเรีย/เซลล์ทั้งหมด, ใน 10^6

หมายเหตุ:

1. ถ้า ΔA_test น้อยกว่า 0.010 หรือการดูดกลืนแสงของหลอดทดลองใกล้เคียงกับหลอดเปล่า, คุณสามารถเพิ่มปริมาตรตัวอย่างก่อนการวัดได้. ถ้า ΔA_test มากกว่า 0.5, ขอแนะนำให้เจือจางส่วนลอยเหนือตะกอนของตัวอย่างอย่างเหมาะสมด้วยสารละลายสำหรับการสกัดก่อนการวัด. หมายเหตุให้ปรับสูตรการคำนวณไปพร้อมๆ กัน.
2. หากตัวอย่างขุ่นหลังจากเติมผู้พัฒนาสีแล้ว, ขอแนะนำให้เจือจางส่วนลอยเหนือตะกอนของตัวอย่างอย่างเหมาะสมด้วยสารละลายสำหรับการสกัดก่อนการวัด. หมายเหตุให้ปรับสูตรการคำนวณไปพร้อมๆ กัน.

ตัวอย่างการทดลอง:

1. นำตัวอย่างซีรั่มของมนุษย์ 20μL, เจือจางมัน 10 ครั้งด้วยสารละลายสกัด, ทำตามขั้นตอนการวัด, และวัดโดยใช้จาน 96 หลุม. การคำนวณ: ∆A_test = A_test – A_blank = 0.426 – 0.124 - 0.302, ΔA_มาตรฐาน = A_มาตรฐาน – A_blank = 0.406 – 0.124 - 0.282. คำนวณจากปริมาตรของเหลว: เนื้อหาอัลบูมิน (มก./มล) - 5 × ∆A_test ∆∆A_มาตรฐาน × 10 (ปัจจัยการเจือจาง) - 53.546 มก./มล.