β-galactosidase (β-gal) ชุดทดสอบ
บันทึก: ใช้ตัวอย่างที่แตกต่างกันสองหรือสามตัวอย่างเพื่อทำนายก่อนการทดสอบ.
อุปกรณ์การดำเนินงาน: เครื่องอ่านไมโครเพลท/สเปกโตรโฟโตมิเตอร์
หมายเลขแค็ตตาล็อก: BC2585
ขนาด:100ที/48ส
ส่วนประกอบ:
สารสกัดโซลูชั่น: ของเหลว 100 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
ทางออก i: ผง×1. การจัดเก็บที่ -20 ℃. เพิ่ม 2.55 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นต่อขวดก่อนใช้และละลายอย่างเต็มที่. ร้านน้ำยารีเอเจนต์ซ้ายที่ -20 ℃.
วิธีแก้ปัญหาⅱ: ของเหลว 4 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
วิธีแก้ปัญหาⅲ: ของเหลว 15 มล.×1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃.
มาตรฐาน: ของเหลว 1 ml × 1. การเก็บรักษาที่ 4 ℃. 5 สารละลายμmol/ml P-nitrophenol.
รายละเอียดสินค้า
β-galactosidase (β-gal, อีซี 3.2.1.23) เป็นเอนไซม์ที่พบในวงกว้างในสัตว์, พืช, จุลินทรีย์และเซลล์เพาะเลี้ยง, ซึ่งสามารถกระตุ้นการไฮโดรไลซิสของพันธะ gal-galactosyl และยังมีฟังก์ชั่นของ transglycosylation. β-gal สามารถปลดปล่อยพลังงานที่เก็บไว้สำหรับการเจริญเติบโตอย่างรวดเร็วของพืช, ยังเร่งการสลายตัวของ polysaccharides, glycoproteins, และกาแลคโตสเทอร์มินัลกาแลคโตสตกค้างในการเผาผลาญ polysaccharide ปกติ, การเผาผลาญส่วนประกอบของผนังเซลล์และระหว่างผนังเซลล์อายุเพื่อปล่อยกาแลคโตสฟรี.
β-gal สามารถกระตุ้น p-nitro phenyl-β-pyran galactoside ไปยัง p-nitro phenol. ผลิตภัณฑ์มีลักษณะการดูดซึมที่ 400 นาโนเมตร. ในชุดนี้, กิจกรรมβ-gal ถูกวัดปริมาณโดยการวัดการเพิ่มขึ้นของการพัฒนาสีที่ 400 นาโนเมตร.
รีเอเจนต์และอุปกรณ์ที่จำเป็นแต่ไม่ได้จัดเตรียมไว้ให้.
เครื่องอ่านไมโครเพลทหรือสเปกโตรโฟโตมิเตอร์, เครื่องหมุนเหวี่ยง, อ่างน้ำ, ปิเปตโอน, คิวเวทท์แก้วไมโคร/แผ่นก้นแบน 96 หลุม, น้ำแข็ง, ปูน/homogenizer และน้ำกลั่น.
ขั้นตอน
ฉัน. การเตรียมตัวอย่างมาตรฐาน:
- แบคทีเรียหรือเซลล์
การรวบรวมแบคทีเรียหรือเซลล์ลงในหลอดเซนติเมตร, หลังจากการหมุนเหวี่ยงทิ้ง supernatant. แนะนำเพิ่ม 1 สารละลายสารสกัดจาก ML ถึง 5 แบคทีเรียหรือเซลล์ล้านล้าน. ใช้ ultrasonication เพื่อแยกแบคทีเรียและเซลล์ (วางบนน้ำแข็ง, พลังงานอัลตราโซนิก 20%, เวลาทำงาน 3 วินาที, ช่วงเวลา 10 วินาที, ทำซ้ำเพื่อ 30 ครั้ง). เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 15000 × g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ℃เพื่อกำจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำและใช้ supernatant บนน้ำแข็งก่อนทดสอบ.
- เนื้อเยื่อ
เพิ่ม 1 สารละลายสารสกัดจาก ML ถึง 0.1 กรัมของเนื้อเยื่อ, และเป็นเนื้อเดียวกันอย่างเต็มที่ในอ่างน้ำแข็ง. เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 15000 × g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ℃ เพื่อขจัดวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ, และนำส่วนเหนือตะกอนไปบนน้ำแข็งก่อนทำการทดสอบ.
ครั้งที่สอง. การกำหนด
- เปิดเครื่องอ่านไมโครเพลทหรือสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ให้ร้อนมากกว่า 30 นาที, ปรับความยาวคลื่นเป็น 400 นาโนเมตร, ตั้งศูนย์ด้วยน้ำกลั่น.
- มาตรฐานเจือจางสารละลายเพื่อ 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 0 NMOL/ml ด้วยน้ำกลั่น.
- เพิ่มรีเอเจนต์ตามรายการต่อไปนี้:
| รีเอเจนต์ | หลอดทดลอง (ต) | หลอดคอนทราสต์ (ค) | ท่อมาตรฐาน (ส) |
| ทางออก i (ไมโครลิตร) | 25 | – | – |
| น้ำกลั่น (ไมโครลิตร) | – | 25 | – |
| วิธีแก้ปัญหาⅱ (ไมโครลิตร) | 35 | 35 | – |
| ตัวอย่าง (ไมโครลิตร) | 10 | 10 | – |
| ผสมอย่างละเอียดและฟักปฏิกิริยาสำหรับ 30 นาทีที่ 37 ℃อ่างน้ำ. | |||
| มาตรฐาน (ไมโครลิตร) | – | – | 70 |
| วิธีแก้ปัญหาⅲ (ไมโครลิตร) | 130 | 130 | 130 |
ผสมให้เข้ากัน. ตรวจจับการดูดกลืนแสงของแต่ละหลอดที่ 400 NM และสังเกตว่าที่, เครื่องปรับอากาศ, เป็นและ AB. คำนวณ
ΔAT = ที่ – เครื่องปรับอากาศ, Δas = AS – เอบี. แต่ละหลอดทดสอบควรได้รับหลอดคอนทราสต์เดียว.
สาม. คำนวณ:
1. เส้นโค้งมาตรฐาน
สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน: ตามความเข้มข้นของหลอดมาตรฐาน (y nmol/ml) และการดูดกลืนแสงΔas = AS – เอบี (x), สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน. เพิ่มΔAลงในเส้นโค้งมาตรฐาน, และคำนวณปริมาณของผลิตภัณฑ์ที่สร้างขึ้นโดยตัวอย่าง (นาโนโมล/มล).
2. การคำนวณ
- ความเข้มข้นของโปรตีนเนื้อเยื่อ
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการสร้าง 1 NMOL ของ P-nitrophenol ในระบบปฏิกิริยาต่อชั่วโมง, โปรตีน MG ทุกชนิด.
กิจกรรมβ-gal(U/มก)-(y × vrv)÷(เทียบกับ×ซีพีอาร์)÷ t = 14 × y ÷ cpr
- น้ำหนักเนื้อเยื่อ
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการสร้าง 1 NMOL ของ P-nitrophenol ในระบบปฏิกิริยาต่อชั่วโมง, ตัวอย่าง G ทุก ๆ.
กิจกรรมβ-gal(u/g )- (y × vrv)÷(w × vs ÷ ve)÷ t = 14 × y ÷ w
- แบคทีเรียหรือเซลล์เพาะเลี้ยง
คำจำกัดความของหน่วย: กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วยถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่เร่งการสร้าง 1 NMOL ของ P-nitrophenol ในระบบปฏิกิริยาต่อชั่วโมง, ทั้งหมด 104 แบคทีเรียหรือเซลล์.
กิจกรรมβ-gal(เซลล์ U/104)-(y × vrv)÷(500×Vs۞Ve)÷ t = 0.028 × y
ซีพีอาร์: ความเข้มข้นของโปรตีน (มก./มล); เชือก: ปริมาตรปฏิกิริยาทั้งหมด, 0.07 มล;
เทียบกับ: ปริมาณซูเปอร์เนต, 0.01 มล; เวอ: สารสกัดสารละลาย,1 มล;
ต: เวลาเกิดปฏิกิริยา (นาที), 30 นาที = 0.5 ชั่วโมง; ว: น้ำหนักตัวอย่าง, ก;
500: 5 ล้านเซลล์หรือแบคทีเรีย.
สินค้าที่เกี่ยวข้อง：
BC0340/BC0345 ชุดทดสอบเนื้อหา Glucogen
BC0360/BC0365 β-1,3-glucanase(B-1,3-ga) ชุดทดสอบกิจกรรม
รีวิว
ยังไม่มีบทวิจารณ์