ชุดสกัดดีเอ็นเอจีโนม SWAB ในช่องปาก

1. ส่วนประกอบของชุดรีเอเจนต์

2. พื้นที่จัดเก็บ

ชุดรีเอเจนต์นี้ควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (15-25℃) และในสภาวะแห้ง, มีอายุการเก็บรักษาที่ 12 เดือน. คอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์จากการสกัด DNA สามารถเก็บไว้ได้ 1 ปีในสภาพแวดล้อมที่เย็นและแห้ง. โปรตีน K และ อาร์เนส เอ มีสารกันบูด, จึงสามารถขนส่งได้ที่อุณหภูมิห้อง, แต่สำหรับการจัดเก็บระยะยาว, ควรเก็บไว้ที่ -20 ℃.

3. คำแนะนำในการใช้ชุดรีเอเจนต์

3.1 ชุดรีเอเจนต์นี้มีไว้สำหรับการวิจัยอณูชีววิทยา และไม่ควรใช้สำหรับการวินิจฉัยหรือการรักษาโรค.

3.2 ส่วนประกอบบางอย่างในชุดรีเอเจนต์มีสารระคายเคือง. แนะนำให้ใช้มาตรการป้องกัน เช่น การสวมชุดป้องกันและแว่นตา.

3.3 ระหว่างการใช้งานชุดรีเอเจนต์นี้, เครื่องหมุนเหวี่ยงความเร็วสูง, อ่างอาบน้ำ (อาบน้ำโลหะ), เครื่องผสมน้ำวน, เอทานอลปราศจากน้ำ, น้ำปราศจากไอออนฆ่าเชื้อ, และผู้ใช้ต้องเตรียมท่อ EP.

4. ข้อมูลเบื้องต้นเกี่ยวกับชุดรีเอเจนต์

Swab ในช่องปาก การทำให้บริสุทธิ์ของดีเอ็นเอ KIT ให้วิธีการที่รวดเร็วและมีประสิทธิภาพสำหรับการทำให้ดีเอ็นเอบริสุทธิ์จาก swabs ช่องปาก, ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการสกัดเซลล์เยื่อบุผิวเช่นเยื่อบุผิวในช่องปาก.

ชุดการทำให้บริสุทธิ์อย่างรวดเร็วของ DNA SWAB DNA สามารถแยก DNA ทั้งหมดออกจากเซลล์เยื่อบุผิวในช่องปากภายใน 30 นาที. กระบวนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดไม่จำเป็นต้องใช้รีเอเจนต์ที่เป็นพิษเช่นฟีนอลคลอโรฟอร์ม. DNA ที่สกัดออกมาสามารถนำมาใช้ได้โดยตรง พีซีอาร์, การซับใต้, และแอพพลิเคชั่นอื่น ๆ.

5. หลักและวิธีการทดลอง

6. กระบวนการสกัด

ก่อนเริ่มการทดลอง:

ก. สารรีเอเจนต์บัฟเฟอร์ B และ C อาจตกตะกอนภายใต้สภาวะอุณหภูมิต่ำ. เราขอแนะนำให้ร้อนที่ 65 ℃สำหรับ 5 นาที. หลังจากการตกตะกอนละลาย, สามารถใช้งานได้ตามปกติ.

บี. ก่อนใช้งาน, เพิ่มจำนวนเอทานอลที่ปราศจากน้ำ ล้างบัฟเฟอร์ 1ตามที่ระบุไว้บนฉลากขวด. ทำเครื่องหมายตรวจสอบฉลากเพื่อระบุการเพิ่มเอทานอลที่ปราศจากน้ำ.

ค. บัฟเฟอร์การชะล้างคือ0.1x โซลูชัน TEมี EDTA จำนวนน้อยที่สุด. หาก EDTA อาจส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป, ขอแนะนำให้ทดแทนบัฟเฟอร์การกำจัดด้วยน้ำปราศจากไอออนที่ผ่านการฆ่าเชื้อ.

1. การจัดการตัวอย่าง:
2. การสุ่มตัวอย่าง: ใช้ผ้าฝ้ายที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว, ใส่เข้าไปในปาก, ถูกับแก้มด้านในไปมามากกว่ามากกว่า 20 ครั้ง.
3. ใช้กรรไกรเพื่อตัดหัวผ้าฝ้าย, วางไว้ในไฟล์ 2 หลอดเซนติเมตร ML, และเพิ่ม 400ไมโครลิตรของ รีเอเจนต์ บัฟเฟอร์ B.
4. เพิ่ม10μl proteinase k (10 มก./มล) และ10μl RNase A (10 มก./มล), คว่ำ, บ่มที่ 65 ° C สำหรับ 20 นาที, กระแสน้ำวนสำหรับ 10 วินาทีระหว่างการฟักตัว.
5. เพิ่ม 400ไมโครลิตรของ รีเอเจนต์ บัฟเฟอร์ Cถึงไลซีน, กระแสน้ำวน.
6. เพิ่ม 200μlของเอทานอลสัมบูรณ์, ผสมให้เข้ากัน; การเร่งรัดอาจเกิดขึ้น, แต่จะไม่ส่งผลต่อการทดลองครั้งต่อไป.
7. ถ่ายโอนของเหลวที่ได้รับไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและการทำให้บริสุทธิ์ (ชุด) (ประมาณ 650~700μl ในแต่ละครั้ง), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ >8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเหลวที่เก็บรวบรวมไว้, และใส่เข้าไปในคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์อีกครั้ง (ชุด) สำหรับขั้นตอนต่อไป.
8. วางคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและการทำให้บริสุทธิ์ (ชุด) ลงในคอลเลกชัน, เพิ่ม 300μl ของ Wash Buffer 1, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ >8,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 1 นาที, ทิ้งของเสียของเสีย, และใส่คอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและการทำให้บริสุทธิ์อีกครั้ง (ชุด) ลงในท่อเพื่อขั้นตอนต่อไป.

(บันทึก: ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีการเพิ่มเอทานอลที่สมบูรณ์ในการล้างบัฟเฟอร์ 1.)

7. เพิ่ม 500μl ของ Wash Buffer 1ไปยังคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและการทำให้บริสุทธิ์ (ชุด), เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที (20,000×ก) สำหรับ 2 นาที, ขยายเวลาการหมุนเหวี่ยงอย่างเหมาะสมเพื่อทำให้เมมเบรนแห้งต่อไป.
8. วางคอลัมน์การสกัดดีเอ็นเอและการทำให้บริสุทธิ์ (ชุด) ลงในหลอดหมุนเหวี่ยงใหม่, เปิดฝา, บ่มที่ 65 ° C สำหรับ 2 นาที; ขั้นตอนนี้สามารถขยายได้อย่างเหมาะสมเพื่อระเหยเอทานอลให้มากที่สุด, ป้องกันการตกค้างเอทานอลที่มีผลต่อการทดลองดาวน์สตรีม.
9. ทำให้ขุ่นมัว 100μl ของบัฟเฟอร์การชะล้างลงบนเมมเบรน, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที.

(บันทึก: 1. การขจัดดีเอ็นเอที่มี50μLของบัฟเฟอร์การชะ; 2. ดีเอ็นเอที่ไหลออกมาใน eluate สามารถนำไปใช้กับคอลัมน์การสกัด DNA และคอลัมน์การทำให้บริสุทธิ์, เครื่องหมุนเหวี่ยงอีกครั้งที่ 12,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาทีเพื่อเพิ่มผลผลิตดีเอ็นเอ)